Por Nitu Bansal | Atualizado em 24 de março de 2022

A clonagem TA oferece uma abordagem simples e sem restrições para a subclonagem de produtos de PCR. A técnica aproveita o emparelhamento complementar de timina e adenina, permitindo a ligação direta sem a necessidade de enzimas de restrição. A amplificação por PCR é normalmente realizada com Taq polimerase, que adiciona uma única saliência 3'-adenina a cada fita de DNA.

Método

Na clonagem TA, um vetor linearizado - conhecido como vetor T - contém saliências únicas de 3′-T. O produto de PCR, com saliências de 3′-A, é misturado com o vetor T em uma proporção molar elevada. A DNA ligase T4 é então adicionada à mistura, permitindo que os pares A-T complementares se unam e sejam selados, resultando em um plasmídeo recombinante.

Vantagens e Desvantagens

Prós:

• Protocolo rápido e simples – sem necessidade de enzimas de restrição.
• Ideal para clonar fragmentos sem locais de restrição adequados.
• Alta eficiência de ligadura ao usar vetores T de alta qualidade.

Contras:

• Os kits comerciais podem ser caros, limitando o uso generalizado.
• A clonagem não direcional aumenta a chance de reversão da orientação da inserção.

Kits de clonagem TA

Os principais fabricantes fornecem kits de clonagem TA prontos para uso, incluindo Invitrogen, QIAGEN e Premier Biosoft. Esses kits fornecem vetores T pré-preparados e reagentes de ligadura otimizados para agilizar o fluxo de trabalho.