Eletroforese de limite livre ou em movimento

A eletroforese de limite livre ou móvel é um tipo de técnica de eletroforese que se baseia no movimento de um limite nítido entre uma solução contendo o analito (a substância de interesse) e uma solução buffer . Esta técnica foi desenvolvida por arne tiselius na década de 1930 e ganhou o prêmio Nobel em química em 1948 .

Veja como funciona:

1. Preparação: Uma solução que contém o analito está em camadas sobre uma solução tampão em um tubo de vidro vertical. As duas soluções têm diferentes índices de refração, criando um limite visível.
2. eletroforese: Um campo elétrico é aplicado no tubo. As moléculas de analito carregadas migram em direção ao eletrodo com a carga oposta.
3. Migração: As moléculas do analito se movem através da solução tampão, criando um limite em movimento que pode ser observado usando schlieren óptica . Essa técnica usa refração leve para visualizar o limite e medir seu movimento.
4. Análise: A taxa de migração do limite é proporcional à mobilidade eletroforética do analito , que é determinado por sua carga e tamanho. Essas informações podem ser usadas para identificar e quantificar diferentes componentes na mistura do analito.

Principais recursos da eletroforese de limite livre ou móvel:

* sem meio de suporte: O analito migra através de um tampão de líquido, ao contrário de outras técnicas de eletroforese que usam géis ou membranas.
* Limite nítido: A presença de um limite distinto permite uma medição precisa da migração do analito.
* Análise quantitativa: A técnica é adequada para análise quantitativa de diferentes componentes em uma mistura.
* Resolução limitada: Comparado a outras técnicas de eletroforese, a eletroforese em movimento em movimento tem uma resolução limitada para separar misturas complexas.

Aplicações:

* Caracterização da proteína: Determinando a pureza e homogeneidade das soluções de proteínas.
* foco isoelétrico: Identificando o ponto isoelétrico das proteínas.
* Análise de proteína sérica: Estudando a composição das proteínas séricas em aplicações clínicas.

Limitações:

* Resolução limitada: Comparado a outras técnicas, possui um poder de resolução mais baixo para misturas complexas.
* Desafios técnicos: Requer equipamentos especializados e condições experimentais precisas.
* demorado: O processo pode ser relativamente demorado.

Técnicas modernas:

Embora a eletroforese de limite livre ou móvel tenha sido um avanço significativo em seu tempo, ela foi amplamente substituída por técnicas de eletroforese mais sofisticadas e versáteis, como a eletroforese com gel e eletroforese capilar . Essas técnicas oferecem maior resolução, operação mais simples e aplicabilidade mais ampla.

No entanto, o significado histórico da eletroforese de limite livre ou em movimento permanece à medida que abriu o caminho para o desenvolvimento de técnicas modernas de eletroforese que são amplamente utilizadas em vários campos atualmente.