Os biólogos usam uma variedade de técnicas para isolar os componentes celulares, dependendo da organela ou da molécula em que estão interessados. Aqui estão alguns dos métodos mais comuns:

1. Interrupção da célula:

* Métodos mecânicos:
* homogeneização: Usando um liquidificador ou um homogeneizador de alta velocidade para quebrar fisicamente células abertas.
* sonicação: Usando ondas sonoras para interromper as membranas celulares.
* French Press: Forçar as células através de uma pequena abertura sob alta pressão.
* moagem: Usando um argamassa e pilão para quebrar fisicamente as células.
* Métodos químicos:
* detergentes: Descubra as membranas celulares dissolvendo lipídios.
* enzimas: Use enzimas específicas como a lisozima para degradar as paredes celulares.
* choque osmótico: Alterando a pressão osmótica da solução para interromper as membranas celulares.

2. Centrifugação diferencial:

* Após a interrupção da célula, o lisado celular é girado em velocidades e durações crescentes. Isso separa os componentes com base em seu tamanho e densidade.
* centrifugação de baixa velocidade: Pellet componentes maiores, como núcleos e detritos celulares.
* centrifugação de média velocidade: Mitocôndrias e lisossomos de pellets.
* centrifugação de alta velocidade: Microssomos e ribossomos de pellets.
* ultracentrifugação: Componentes menores do sedimento, como proteínas e ácidos nucleicos.

3. Centrifugação do gradiente de densidade:

* Este método refina ainda a separação alcançada por centrifugação diferencial. Um gradiente de sacarose ou outras substâncias é criado em um tubo e o lisado celular é colocado em camadas no topo. Durante a centrifugação, os componentes se movem pelo gradiente até atingirem uma densidade igual à sua.
* Tipos:
* gradiente de sacarose: Comumente usado para separar organelas.
* gradiente de cloreto de césio: Excelente para isolar o DNA e o RNA.

4. Cromatografia em afinidade:

* Este método explora a ligação específica de uma molécula alvo a um ligante imobilizado em uma coluna.
* ligante: Uma molécula que se liga especificamente à molécula alvo.
* coluna : Uma matriz sólida com o ligante imobilizado.
* Eluição: Após a ligação, a molécula alvo é eluída da coluna usando uma solução específica.

5. Eletroforese:

* Usado para separar proteínas com base no tamanho e na carga e nos ácidos nucleicos com base no tamanho.
* SDS-PAGE: Separa proteínas com base no tamanho.
* eletroforese em gel de agarose: Separa os ácidos nucleicos com base no tamanho.

6. Imunoprecipitação:

* Este método usa anticorpos para isolar proteínas específicas.
* Anticorpos : Se ligar a uma proteína de interesse específica.
* precipitação: Após a ligação, o complexo proteico-anticorpo é precipitado fora da solução.

7. Citometria de fluxo:

* Este método usa lasers e sondas fluorescentes para analisar e classificar células ou componentes celulares com base em suas características físicas e biológicas.

Exemplo:isolando mitocôndrias

* As células são interrompidas usando homogeneização ou uma imprensa francesa.
* O lisado celular é centrifugado a uma velocidade média para as mitocôndrias de pellets.
* O sedimento é ressuspenso e purificado posteriormente usando centrifugação de gradiente de densidade.

A escolha do método depende do tipo de célula específico, da organela ou da molécula de interesse e do nível de pureza desejado. Cada técnica tem seus pontos fortes e fracos, e os pesquisadores geralmente usam uma combinação de métodos para obter os resultados desejados.