As células que contêm DNA recombinante são selecionadas usando uma variedade de técnicas. Aqui estão alguns dos métodos mais comuns:

1. Marcadores de resistência a antibióticos:

* Princípio: Este método depende da inserção de um gene de resistência a antibióticos junto com o gene desejado no vetor. As células que adotam com sucesso o vetor recombinante também adquirirão resistência ao antibiótico específico.
* Procedimento: As células são cultivadas em meio contendo o antibiótico. Somente células que adotaram o vetor recombinante e expressam o gene da resistência sobreviverão e formarão colônias.
* Exemplo: O gene de resistência à ampicilina comumente usado (AMPR) permite que as bactérias sobrevivam na presença de ampicilina.

2. Genes da repórter:

* Princípio: Os genes repórters codificam proteínas que produzem um sinal detectável, permitindo fácil identificação de células contendo o DNA recombinante.
* Procedimento: Os genes repórters estão frequentemente ligados ao gene desejado; portanto, a expressão do gene repórter indica a inserção bem -sucedida do DNA recombinante.
* Exemplos:
* gene lacz: Codifica beta-galactosidase, que quebra um substrato (x-gal) para produzir uma cor azul.
* gene gfp: Codifica a proteína fluorescente verde, que faz com que as células brilhem em verde sob luz UV.

3. Seleção de cores:

* Princípio: Este método utiliza um sistema genético em que a presença do DNA recombinante altera a cor das células.
* Procedimento: As células que contêm o DNA recombinante exibirão uma cor diferente em comparação com as células sem ele.
* Exemplo: O método de triagem azul-branco usa um vetor com o gene lacZ interrompido pelo local de inserção para o DNA recombinante. As células com o DNA recombinante produzirão colônias brancas, enquanto as células sem ele produzirão colônias azuis.

4. Complementação:

* Princípio: Este método é usado quando o gene desejado é necessário para a célula sobreviver ou produzir um produto específico.
* Procedimento: As células sem um gene funcional são transformadas com o vetor recombinante que contém o gene. Somente células com o gene funcional sobreviverão ou produzirão o produto desejado.
* Exemplo: Uma cepa de bactérias sem uma enzima específica pode ser transformada com um vetor contendo o gene que codifica a enzima. Somente as bactérias transformadas poderão sobreviver e crescer.

5. Classificação de células ativadas por fluorescência (FACS):

* Princípio: O FACS utiliza a marcação de fluorescência para identificar e classificar células com base em características específicas.
* Procedimento: As células que expressam o gene desejado (ligadas a um marcador fluorescente) são classificadas do restante com base em suas propriedades de fluorescência.
* Vantagens: Triagem de alto rendimento, separação precisa e classificação eficiente das células.

6. Triagem de PCR:

* Princípio: A PCR pode ser usada para amplificar uma sequência de DNA específica, confirmando a presença do DNA recombinante.
* Procedimento: O DNA é extraído das células e amplificado usando iniciadores específicos para o gene inserido. A presença do produto amplificado indica inserção bem -sucedida.

A escolha do método de seleção depende do experimento específico, do vetor utilizado e do resultado desejado.