Princípio da Glicose-6-Fosfato Desidrogenase (G6PD)

O princípio do ensaio de glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) baseia-se na reação enzimática catalisada pela G6PD. A G6PD é uma enzima que desempenha papel crucial na via das pentoses fosfato, via metabólica responsável pela geração de NADPH, um agente redutor.

Neste ensaio, G6PD catalisa a oxidação de glicose-6-fosfato (G6P) em 6-fosfogluconato (6-PG) usando NADP+ como aceptor de elétrons. Durante esta reação, o NADP+ é reduzido a NADPH, que apresenta uma forte absorvância a 340 nm. Medindo o aumento da absorvância a 340 nm ao longo do tempo, a actividade enzimática da G6PD pode ser quantificada.

Aqui estão as principais etapas envolvidas no ensaio G6PD:

1. Preparação da amostra: É preparada uma amostra contendo G6PD, tal como um lisado celular ou homogeneizado de tecido.

2. Mistura de reação: A mistura de reação normalmente inclui G6P, NADP+, uma solução tampão e a amostra contendo G6PD.

3. Incubação: A mistura de reação é incubada a uma temperatura e pH específicos, permitindo que a reação enzimática ocorra.

4. Medição espectrofotométrica: A absorvância da mistura reaccional é medida a 340 nm utilizando um espectrofotómetro. Esta leitura de absorvância corresponde à quantidade de NADPH produzida.

5. Cálculos: A mudança na absorvância a 340 nm ao longo do tempo é usada para calcular a atividade enzimática da G6PD. Este cálculo considera o coeficiente de extinção do NADPH e o volume da mistura reacional.

6. Unidades de atividade enzimática: A atividade de G6PD é comumente expressa em unidades por litro (U/L) ou unidades internacionais por litro (UI/L), onde uma unidade de atividade enzimática representa a quantidade de enzima necessária para produzir 1 micromole de NADPH por minuto sob as condições de ensaio especificadas .

A medição da atividade da G6PD tem significado clínico, pois as deficiências da G6PD podem levar a uma condição conhecida como deficiência de G6PD, que causa anemia hemolítica quando exposta a certos medicamentos ou substâncias. Os ensaios de G6PD são realizados para diagnosticar a deficiência de G6PD e monitorar a atividade enzimática em indivíduos com a doença.