Extração de sabão de sal: 1.
Lise Celular: - Reúna seus materiais que incluem uma amostra de células (tecido vegetal ou animal), sal, sabão líquido para lavar louça e um tampão de extração de DNA (tampão TE ou tampão Tris-EDTA).
- Coloque um pequeno pedaço da amostra de tecido em um almofariz ou em um pequeno recipiente com tampa.
- Adicione uma pequena quantidade de sal à amostra (cerca de 1/4 colher de chá por 1 grama de tecido).
- Adicione algumas gotas de sabão líquido à mistura e triture ou amasse bem o tecido.
- Esta etapa rompe as membranas celulares, liberando o DNA.
2.
Precipitação de Proteínas: - Transfira o lisado (a mistura de células quebradas) para um tubo de centrífuga.
- Adicione um volume de tampão de extração de DNA frio igual ao volume do lisado. Misture bem.
- O tampão de extração de DNA contém detergentes que ajudam a dissolver membranas celulares e proteínas, bem como uma solução salina que ajuda a precipitar proteínas (incluindo histonas associadas ao DNA) da solução.
- As proteínas formam um aglomerado e se separam do DNA.
3.
Precipitação de DNA: - Centrifugar a mistura durante alguns minutos a alta velocidade (cerca de 12.000–15.000 rpm).
- Isto fará com que as proteínas precipitadas e os restos celulares formem um pellet no fundo do tubo, deixando o DNA no sobrenadante (o líquido acima do pellet).
4.
Coleta de DNA: - Remova cuidadosamente o sobrenadante, que contém o DNA, para um novo tubo.
- Evite transferir qualquer pellet, pois contém principalmente proteínas e detritos celulares.
- O DNA está agora numa forma relativamente pura, livre da maioria dos componentes celulares e proteínas.
Extração de etanol: 1.
Precipitação de DNA: - Ao tubo que contém a solução de DNA da extração com sabão salino, adicione igual volume de etanol 95%-100% frio.
- Misture suavemente invertendo o tubo várias vezes. Não agite no vórtice, pois isso pode cortar o DNA.
- O DNA começará a precipitar da solução como uma massa branca e fibrosa.
2.
Lavagem de DNA: - Centrifugar a mistura durante alguns minutos a alta velocidade (cerca de 12.000–15.000 rpm).
- O DNA formará um pellet no fundo do tubo. remova cuidadosamente o sobrenadante (a solução de etanol) sem perturbar o pellet.
3.
Secagem de DNA: - Lave suavemente o pellet de DNA com etanol frio a 70% para remover quaisquer sais residuais.
- Centrifugar brevemente para coletar o DNA no fundo do tubo.
- Remover cuidadosamente o etanol sem mexer no pellet.
- Deixe o pellet de DNA secar ao ar por alguns minutos.
4.
Ressuspensão de DNA: - Adicione uma pequena quantidade de tampão de extração de DNA (tampão TE ou tampão Tris-EDTA) ao tubo que contém o pellet de DNA.
- Use uma micropipeta para ressuspender suavemente o DNA pipetando para cima e para baixo até que esteja completamente dissolvido.
- O DNA está agora pronto para análises posteriores, como PCR, eletroforese em gel ou outras técnicas de biologia molecular.
Ambos os métodos visam romper a membrana celular, liberar DNA e depois separar o DNA de outros componentes celulares por meio de precipitação e centrifugação. Eles fornecem uma maneira simples e econômica de extrair DNA para experimentos básicos e fins educacionais.