Aqui está um colapso de como obter clones de célula única de uma cultura, juntamente com as principais considerações:

Métodos para obter clones de célula única

1. Clonagem de diluição (diluição limitada)
- Princípio: Diluindo a suspensão celular em uma concentração baixa o suficiente para que as células individuais sejam separadas e plaqueadas em poços ou manchas individuais.
- Procedimento:
- 1. Preparação: Determine a concentração celular aproximada de sua cultura usando um hemocitômetro ou contador de células.
- 2. Diluição: Calcule o fator de diluição necessário para atingir a densidade celular desejada (por exemplo, 1 célula por poço). Dilua sua suspensão de celular de acordo.
- 3. Placamento: Placa as células diluídas em uma placa de vários poços (96 poços, 24 poços, etc.) ou em uma placa de Petri.
- 4. Incubação: Permita que as células cresçam e formem colônias.
- 5. Seleção: Identifique poços ou áreas com colônias únicas (uma célula deu origem a toda a colônia).

2. micromanipulação (seleção microscópica)
- Princípio: Usando um microscópio e um micromanipulador para pegar fisicamente uma única célula e transferi -la para um novo meio de crescimento.
- Procedimento:
- 1. Preparação: Use um microscópio com um micromanipulador.
- 2. Seleção de células: Identifique uma única célula de interesse sob o microscópio.
- 3. Isolamento: Use cuidadosamente o micromanipulador para pegar a célula.
- 4. Transferência: Transfira a célula para um novo meio de crescimento (por exemplo, um pequeno prato de cultura ou um microtubo).
- 5. Incubação: Deixe a célula crescer em uma colônia.

3. Classificação baseada em citometria de fluxo
- Princípio: Usando um citômetro de fluxo para classificar as células com base em características específicas (por exemplo, tamanho, fluorescência).
- Procedimento:
- 1. Rotulagem: Se necessário, rotule as células com marcadores fluorescentes para diferenciá -las dos outros.
- 2. Classificação: Execute a suspensão celular através do citômetro de fluxo. O instrumento analisa e separa as células com base nos parâmetros especificados.
- 3. Coleção: Colete células de interesse em um novo meio de crescimento.
- 4. Incubação: Permita que as células cresçam em colônias.

Considerações para clonagem de célula única

* Tipo de célula: Diferentes tipos de células têm diferentes características de crescimento. Alguns são mais sensíveis ao isolamento do que outros.
* Meio de crescimento: A escolha do meio de cultura é fundamental para apoiar o crescimento de célula única.
* Clone Purity: Verifique se as colônias selecionadas se originam de uma única célula.
* tempo: A clonagem pode levar tempo, pois as células únicas precisam se multiplicar em uma colônia.
* Aplicações:
- Desenvolvimento da linha celular: Criando linhas celulares puras com propriedades específicas.
- Triagem de medicamentos: Testando efeitos de drogas em células individuais.
- Pesquisa genética: Estudando expressão gênica e mutações no nível de célula única.

Informe -me se você quiser mais detalhes sobre qualquer um desses métodos ou tiver dúvidas sobre aplicativos específicos!