Proteínas pré-coradas:marcadores de proteínas prontos para uso para eletroforese em gel

As proteínas pré-coradas são misturas de proteínas que foram covalentemente ligadas a um corante . Isso permite que eles sejam visualizados diretamente em um gel , eliminando a necessidade de procedimentos de coloração separados. Eles são comumente usados ​​como marcadores de peso molecular Na eletroforese em gel, particularmente SDS-PAGE (Dodecilsulfato de sódio-poliacrilamida eletroforese em gel).

Aqui está um colapso dos aspectos -chave:

1. Por que usar proteínas pré-manchadas?

* Conveniência: Nenhuma mancha separada é necessária, economizando tempo e esforço.
* rastreamento visual: Permite rastrear o progresso da separação de proteínas durante a eletroforese.
* Determinação de tamanho precisa: Fornece pontos de referência para determinar o peso molecular das proteínas desconhecidas.
* Solução de problemas: Pode ajudar a identificar possíveis problemas na configuração da eletroforese, como carregamento incorreto em gel ou corrida desigual.

2. Como funcionam as proteínas pré-manchadas:

* conjugação de corante: As proteínas estão covalentemente ligadas a um corante, geralmente um corante fluorescente ou colorido.
* Mobilidade eletroforética: O corante não altera significativamente a mobilidade eletroforética da proteína, o que significa que eles migram de acordo com seu peso molecular.
* Visualização: O corante permite a visualização direta das faixas de proteínas no gel, sob luz UV ou com luz visível.

3. Principais características das proteínas pré-manchadas:

* faixa de peso molecular: Disponível em vários intervalos para atender a diferentes necessidades experimentais.
* Propriedades do corante: O corante usado afeta a sensibilidade e a visibilidade das bandas.
* Estabilidade: Algumas proteínas pré-manchadas são mais estáveis ​​que outras e podem suportar condições adversas.
* Compatibilidade: Garanta a compatibilidade com o tampão de eletroforese e o tipo de gel.

4. Aplicações de proteínas pré-manchadas:

* SDS-PAGE Marcadores de peso molecular: A aplicação mais comum.
* Western blotting: Usado como referência de tamanho para proteínas transferidas.
* Monitoramento de purificação de proteínas: Rastrear a migração de proteínas durante os procedimentos de purificação.
* Solução de problemas de eletroforese em gel: Ajude a diagnosticar problemas como carregamento irregular em gel.

5. Tipos de marcadores de proteínas pré-manchados:

* Marcadores de arco -íris: Contém uma mistura de proteínas com cores diferentes para facilitar a identificação de cada banda.
* Marcadores de uma cor única: Contém um único corante e forneça menos diferenciação visual, mas pode ser útil para aplicativos específicos.

6. Vantagens do uso de proteínas pré-manchadas:

* Fluxo de trabalho simplificado: Elimina as etapas de manchas separadas, economizando tempo e esforço.
* rastreamento visual: Permite o monitoramento em tempo real da separação de proteínas durante a eletroforese.
* Determinação de tamanho confiável: Fornece referências precisas de peso molecular.
* Solução de problemas de ajuda: Ajuda a identificar possíveis problemas na configuração da eletroforese.

7. Desvantagens do uso de proteínas pré-manchadas:

* Custo: Pode ser mais caro que os padrões tradicionais de proteínas.
* Sensibilidade: Pode não ser tão sensível quanto os padrões tradicionais de proteínas, especialmente para proteínas de baixa abundância.
* Dye Interference: O corante pode interferir em certas aplicações a jusante, como sequenciamento de proteínas ou espectrometria de massa.


No geral, as proteínas pré-coradas são uma ferramenta conveniente e valiosa para pesquisadores que trabalham com eletroforese em gel. Eles fornecem uma maneira simples e confiável de rastrear a migração de proteínas e determinar o peso molecular. No entanto, é importante escolher o marcador apropriado para o seu aplicativo específico e considerar as limitações potenciais.