Dois métodos para demonstrar como os isolados de fotoliase usam luz para reparar DNA danificado
1. Ensaio de reparo de DNA in vitro Este ensaio mede a capacidade de um isolado de fotoliase de reparar DNA danificado em laboratório. O ensaio normalmente envolve as seguintes etapas:
1. O DNA danificado é gerado pela exposição do DNA à luz ultravioleta (UV) ou a outros agentes prejudiciais ao DNA.
2. O DNA danificado é incubado com um isolado de fotoliase e luz de comprimento de onda apropriado.
3. O DNA reparado é analisado para determinar a extensão do reparo.
Os resultados de um ensaio de reparo de DNA in vitro podem ser usados para comparar a eficiência de reparo de DNA de diferentes isolados de fotoliase, para estudar o mecanismo de reparo de DNA mediado por fotoliase e para identificar potenciais inibidores da atividade de fotoliase.
2. Ensaio de fotorreativação in vivo Este ensaio mede a capacidade de um isolado de fotoliase para reparar DNA danificado em células vivas. O ensaio normalmente envolve as seguintes etapas:
1. As células são expostas à luz UV ou a outros agentes prejudiciais ao DNA para gerar DNA danificado.
2. As células são incubadas com um isolado de fotoliase e luz de comprimento de onda apropriado.
3. As células são analisadas para determinar a extensão da reparação do ADN e da sobrevivência celular.
Os resultados de um ensaio de fotorreativação in vivo podem ser usados para estudar o papel da fotoliase no reparo do DNA em células vivas e para identificar aplicações potenciais da fotoliase no tratamento de doenças relacionadas a danos no DNA.