Um estudo publicado na revista PLOS ONE poderá um dia ajudar os profissionais de saúde a determinar se as bactérias da espécie Streptococcus pneumoniae, que causam meningite – uma inflamação das membranas que envolvem o cérebro e a medula espinhal – são resistentes aos antibióticos.
Este tipo de análise não é tarefa fácil quando se utiliza o método convencional. As bactérias devem ser isoladas de uma amostra de paciente e analisadas ainda vivas, o que é difícil porque os microrganismos são sensíveis e geralmente não sobrevivem ao trajeto até o laboratório.

Um novo método altamente viável foi desenvolvido no Brasil por pesquisadores da filial de Santo André do Instituto Adolfo Lutz (IAL), laboratório central de vigilância epidemiológica do estado de São Paulo. Entre 2014 e 2020, analisaram 873 amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com suspeita de meningite estreptocócica em postos de saúde de seis cidades do estado – Diadema, Mauá, Santo André, São Bernardo do Campo, São Caetano do Sul e Ribeirão Pires. O líquido cefalorraquidiano é produzido pelo tecido que reveste os ventrículos no cérebro. Ele flui dentro e ao redor do cérebro e da medula espinhal para amortecê-los de lesões e fornecer nutrientes.

Como parte da rotina do laboratório, os cientistas analisaram as amostras usando PCR em tempo real, padrão ouro para o diagnóstico de doenças infecciosas, incluindo a COVID-19. A técnica amplifica um gene específico ou uma sequência gênica do microrganismo alvo, caso esteja presente na amostra, para que possa ser identificado mais facilmente. Neste caso, S. pneumoniae (pneumococo) foi detectado em 149 amostras.

Eles então reanalisaram as amostras que testaram positivo para pneumococo para detectar os três genes associados à resistência a antibióticos, novamente usando PCR em tempo real, mas desta vez com SYBR Green, um corante que se liga ao DNA e emite um sinal fluorescente que é capturado pelo equipamento.

Para descobrir a quais classes de antibióticos as bactérias resistiram – penicilina, lincosamidas ou macrolídeos – eles usaram a técnica da curva de dissociação. "Essa técnica consiste em elevar a temperatura das amostras grau a grau, separando o corante do DNA à medida que as fitas gêmeas da dupla hélice que formam o material genético amplificado na máquina de PCR se desenrolam gradualmente. Medimos a temperatura de fusão [Tm], que é quando metade da estrutura ainda está entrelaçada e o resto se separou. Essa temperatura varia de acordo com o gene amplificado, então pode ser usada para identificar o gene que foi amplificado e, portanto, o antibiótico ao qual a bactéria é resistente", disse Ivana Campos, pesquisadora principal do estudo.

Após a realização de todos esses procedimentos, os pesquisadores compararam os resultados com os obtidos pelo método convencional de análise de resistência a antibióticos, no qual são observadas bactérias vivas em contato com cada medicamento para verificar se são capazes de se proliferar. Esse teste convencional foi realizado em 25 amostras, que eram as únicas que continham pneumococos viáveis ​​para o procedimento. Os resultados foram semelhantes, confirmando o potencial da nova técnica.

"We found that 51% of the samples analyzed, which IAL received between 2014 and 2020, were sensitive to antibiotics. That's positive, meaning these patients must have had a good prognosis. On the other hand, 17% were resistant to various drugs, which is very dangerous because in these cases it's more difficult to treat the disease and other classes of antibiotic have to be tried," Campos said.

Moreover, S. pneumoniae is capable of changing its genetic makeup as it reproduces, so that new copies have the genes associated with drug resistance. "We, therefore, concluded that the test we developed can be used to study the resistance profile of pneumococcus even in the absence of the isolated strains, as evidenced for our region," she said. + Explorar mais

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