A eletroforese em gel é uma maneira de separar os fragmentos de DNA de acordo com seu tamanho. Você adiciona corante de rastreamento a cada amostra de DNA para ajudá-lo a ver a amostra e acompanhar o progresso dos fragmentos de DNA através do gel.

Significância

Para separar fragmentos de DNA, com o propósito de medindo seu tamanho ou para isolar um fragmento particular, os cientistas colocam o DNA em um gel de agarose submerso em uma solução que é carregada com uma corrente elétrica. A corrente empurra os fragmentos de DNA através do gel, e como o gel é poroso, pequenos fragmentos de DNA se propagam mais rapidamente. Eles viajam mais do que fragmentos maiores na mesma quantidade de tempo.

Propósito

O DNA é incolor quando está em solução em um tubo de ensaio. Para tornar a amostra mais fácil de ver, tanto no tubo de ensaio como no gel, adicione um corante de rastreamento colorido à amostra. O corante não afeta o DNA em tudo.

Rastreamento

O corante de rastreamento usual é azul de bromofenol em uma solução de glicerol de 50 por cento. O azul de bromofenol colore a amostra de azul brilhante de modo que seja fácil acompanhar seu progresso através do gel. Quando o corante de rastreamento percorreu cerca de 3/4 do comprimento do gel, é hora de desligar a corrente elétrica.

Densidade

O corante de rastreamento é denso devido à sua alta concentração de glicerol. Isso faz com que as amostras de DNA afundem nos slots de carga do gel, em vez de flutuar na solução acima do gel que leva a corrente elétrica.

Dye Migration

Bromofenol azul migra através de uma agarose solução com aproximadamente a mesma taxa que uma fita de DNA contendo 300 pares de bases. Se você quiser acompanhar o progresso de filamentos maiores de DNA, você pode usar um corante de rastreamento com xileno cianol, que migra aproximadamente na mesma taxa que uma fita de DNA com 4.000 pares de bases.