Preparação automatizada de N-glicanos marcados com fluorescência e sensíveis a MS com um robô de pipetagem
p Mapa de contorno mostrando a recuperação de N-glicano marcado total somado de cetuximabe ao longo de uma faixa de temperaturas para desnaturação de proteína (60C a 90C) ao longo do eixo X e de-N-glicosilação (40C a 60C) ao longo do eixo Y. Crédito:Corey Reed
p Um novo relatório de pesquisa original disponível antes da impressão em
Tecnologia SLAS demonstra a semi-automação de um kit GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) usando um robô de pipetagem para melhorar a produtividade da pesquisa em ciências biológicas. Esta plataforma robótica usa pipetadores manuais padrão e um braço guiado opticamente para facilitar a automação de procedimentos manuais, reduzindo o tempo que os pesquisadores passam na bancada do laboratório, e imitando, o mais próximo possível, os resultados obtidos ao usar o protocolo manual GlycoWorks RFMS. p O kit GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) foi lançado em 2015 e simplifica a maneira como os pesquisadores são capazes de liberar e marcar glicanos ligados a N. O kit permite que os analistas realizem uma preparação de amostra de alto rendimento e garante perfis de N-glicanos precisos e repetíveis. A etiqueta RFMS é única no sentido de que fornece marcação rápida e sensibilidade suprema para análises ópticas e espectrométricas de massa.
p Autores Corey Reed, Jennifer Fournier e Stephan Koza da Waters Corporation (Milford MA) e Nikolas Vamvoukas da Andrew Alliance simplificam ainda mais este protocolo de preparação de amostra por meio da automação usando uma solução robótica comercialmente disponível da Andrew Alliance. Andrew, o robô pipetador, apresenta uma plataforma ideal para automação deste kit com sua capacidade de pipetar baixos volumes e se adaptar à variabilidade de volume com dominós customizados construídos especificamente para esta solução.
p Para reproduzir com precisão os resultados do protocolo manual, as etapas sensíveis à temperatura são otimizadas novamente para a plataforma automatizada e uma faixa de temperaturas são testadas para atingir a eficiência máxima de liberação de N-glicano. Após pequenos ajustes, o protocolo automatizado prova ser estatisticamente comparável ao protocolo manual em termos de recuperação de N-glicanos marcados com RFMS, bem como as áreas de pico relativas de fluorescência resultantes. Além disso, uma sub-rotina no procedimento simplifica o processo de normalização da concentração da amostra antes do protocolo RFMS, economizando aos usuários uma quantidade significativa de tempo.
p No fim, os autores pegam um protocolo robusto e fácil de usar e expandem com sucesso os benefícios para a pesquisa em ciências biológicas, aumentando a produtividade do laboratório. Os usuários agora podem fazer a transição perfeita do protocolo manual para a solução automatizada, aliviar os usuários da pipetagem monótona e controlar as principais áreas do protocolo normalmente sujeitas a erros do usuário.