Por David Stewart | Atualizado em 24 de março de 2022

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As enzimas possuem uma conformação tridimensional precisa. Qualquer alteração – seja por temperatura, força iônica ou pH – modifica essa forma e, conseqüentemente, o desempenho catalítico. Cada enzima apresenta um pH ótimo distinto, o ponto em que sua atividade atinge o pico. Desvios deste ótimo distorcem o sítio ativo, diminuindo a taxa de reação. A catecol oxidase, por exemplo, apresenta atividade máxima em torno do pH neutro 7.

O que é Catecol Oxidase?

A catecol oxidase (também conhecida como tirosinase, difenol oxidase ou polifenol oxidase) catalisa a oxidação do catecol na presença de oxigênio para produzir benzoquinona. A exposição ao ar converte ainda mais a benzoquinona em melanina, dando a característica descoloração marrom. A enzima é abundante em muitas frutas e vegetais – incluindo batatas, maçãs e bananas – onde é responsável pelo escurecimento observado quando o tecido é cortado e exposto ao ar.

Extração de Catecol Oxidase

De bananas: Amasse uma banana com o dobro do seu volume de água em um almofariz ou misture com água para produzir um extrato transparente. Coe a mistura em uma musselina com manteiga e leve à geladeira.

De batatas: Descasque e pique uma batata e misture com 700mL de água destilada fria em alta velocidade. Filtre o purê com um pano de algodão e guarde o suco na geladeira.

Procedimento Experimental

1. Prepare soluções tampão com pH 2, 4, 6, 7 e 8. Rotule cinco tubos de ensaio adequadamente.

2. Encha cada tubo até um quarto da capacidade com o respectivo tampão.

3. Adicione 10 gotas de extrato de catecol oxidase seguidas de 10 gotas de catecol.

4. Agite cada tubo e registe imediatamente a intensidade da cor numa escala de 0–5 (0 =incolor, 5 =castanho escuro) e, em seguida, a cada cinco minutos durante os 20 minutos seguintes.

Interpretando resultados

Trace os valores de intensidade de cor de 20 minutos com pH no eixo X e intensidade no eixo Y. O pico da curva resultante indica o pH ideal da enzima. Se o experimento for realizado corretamente, o máximo ocorre em pH7, confirmando a maior eficiência catalítica da enzima em pH neutro.

Precauções de segurança

Tanto a banana quanto a batata contêm catecol, que pode oxidar e contribuir para a cor observada. Mantenha o extrato enzimático resfriado em gelo até o uso. O catecol é tóxico; evite contato com a pele e manuseie com luvas. Se ocorrer derramamento, limpe com papel toalha e use luvas de proteção.