Vmax não é um limite de concentração de substrato para iniciar uma reação enzimática. Vmax é a taxa máxima de reação que uma enzima pode atingir quando está saturada com substrato. Neste ponto, todos os sítios ativos da enzima estão ocupados com moléculas de substrato e a reação prossegue na velocidade mais rápida possível. Aumentar a concentração do substrato além deste ponto não aumentará a taxa de reação, porque todos os sítios ativos da enzima já estão saturados.

O limiar de concentração de substrato para iniciar uma reação enzimática é conhecido como constante de Michaelis, ou Km. Esta é a concentração de substrato na qual a taxa de reação é metade do Vmax. Neste ponto, metade dos sítios ativos da enzima estão ocupados com moléculas de substrato e a reação prossegue na metade da sua taxa máxima possível. Aumentar a concentração de substrato acima do Km aumentará a taxa de reação, mas não atingirá o Vmax até que todos os sítios ativos da enzima estejam saturados.

O Km é um parâmetro importante para a compreensão da cinética das reações enzimáticas. Pode ser usado para determinar a afinidade de uma enzima pelo seu substrato e também para calcular a taxa de uma reação enzimática em uma determinada concentração de substrato.