Bioquímicos e biólogos moleculares usam eletroforese para separar macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos. Isso permite que os cientistas isolem e analisem proteínas individuais ou sequências de ácidos nucleicos em uma mistura complexa. Um exemplo típico de eletroforese em laboratório é um microbiologista usando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para separar fragmentos de DNA produzidos em uma comunidade microbiana. Independentemente do objetivo, a eletroforese sempre exige o uso de uma solução tampão.
TL; DR (muito longo; não leu)
A eletroforese separa macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos por tamanho, "charge and other properties.", 3, [[Para eletroforese que se separa por carga, os cientistas usam buffer para transmitir essa carga através do gel. O tampão também mantém o gel em um pH estável, minimizando as alterações que poderiam ocorrer na proteína ou no ácido nucleico se submetido a um pH instável.
Princípios de eletroforese
A eletroforese separa moléculas ao longo de um gradiente com base em seu tamanho, cobrar ou outras propriedades. Esse gradiente pode ser um campo elétrico ou, no caso da eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE), um desnaturante, como uma mistura de uréia e formamida. As proteínas migrarão para o ânodo se carregado negativamente e o cátodo se carregado positivamente. Como as moléculas maiores migram mais lentamente do que as moléculas menores, os cientistas podem medir a distância percorrida e usar logaritmos para determinar o tamanho dos fragmentos. poder de desnaturação até que seja suficiente para desnaturar ou desdobrar todo esse fragmento de DNA em particular. Nesse ponto, a migração é interrompida. Os cientistas podem usar esse método para separar fragmentos com base em sua suscetibilidade individual à desnaturação.
O que o buffer faz?
No caso de eletroforese que se separa com base na carga, os íons no buffer transmitem a carga necessária para separação. O tampão, ao fornecer um reservatório de ácido e base fracos, também mantém o pH dentro de uma faixa estreita. Isso é importante porque a estrutura e a carga de uma proteína ou ácido nucleico mudam se sujeitas a alterações significativas de pH, impedindo a separação adequada.
Tampões típicos
Tampões diferentes são ideais para manter o gel de eletroforese em diferentes faixas de pH desejadas. Os tampões típicos usados pelos cientistas para esse fim incluem ácido acético, ácido bórico, ácido fosfórico e ácido cítrico, além de glicina e taurina. Geralmente, o valor de pKa (constante de dissociação ácida) deve estar próximo do pH necessário. É preferível, para nós, buffers que fornecem baixa magnitude de carga, para não conduzir muita corrente.
