p O novo ensaio desenvolvido na KAUST é um ensaio de rolamento de célula multiplex fluorescente que usa marcadores fluorescentes exclusivos para marcar até sete tipos de população de células. Crédito:© 2020 Elham Roshdy
p Pesquisadores da King Abdullah University of Science and Technology desenvolveram um método robusto e eficiente de examinar as interações entre as células usando marcação fluorescente, analisar simultaneamente várias populações de células, e acelerar um processo antes tedioso e limitador. O novo ensaio também tem aplicações no estudo de processos celulares na inflamação ou metástase de células cancerosas e na avaliação de tratamentos potenciais. p As células se movem através dos vasos sanguíneos por meio da adesão celular, a interação e fixação de células umas às outras por meio de moléculas especializadas em superfícies celulares. Durante o fluxo sanguíneo, as forças de cisalhamento atuam nas células para orquestrar a adesão celular. A manipulação da adesão celular pode levar à inflamação e doenças como o câncer, enquanto patógenos, como vírus, exploram a adesão celular para infectar o corpo.
p "O ensaio convencional usado para estudar as interações célula-célula é o ensaio de câmara de fluxo de placa paralela (PPFC), que grava vídeos de células rolando em fluxo e aderindo a moléculas nas células endoteliais (células do revestimento dos vasos sanguíneos), "diz o líder do grupo Jasmeen Merzaban." Este ensaio tem sido usado há décadas, mas está sujeito a erros e possíveis vieses, e só pode analisar um tipo de célula por vez, tornando-o extremamente demorado. "
p Ayman AbuElela, com os outros alunos de graduação no laboratório de Merzaban, queria melhorar o PPFC e acelerar as análises.
p Seu novo ensaio de rolamento de célula multiplex fluorescente (FMCR) usa marcadores fluorescentes exclusivos para rotular até sete tipos de população de células. As amostras de células são misturadas antes de entrar no fluxo simulado sobre uma camada de células endoteliais. Um microscópio confocal espectral captura imagens das populações de células mistas em tempo real em alta resolução temporal em uma única passagem. Isso permite que os pesquisadores coletem dados sobre a cinética celular, incluindo a frequência de rolamento, velocidade e capacidade de tethering de tipos de células individuais.
p Ao contrário do ensaio de rolamento celular padrão, que requer uma execução do experimento para cada tipo de célula, o novo ensaio de rolamento de célula multiplex fluorescente da equipe usa marcadores fluorescentes exclusivos para rotular até sete tipos de população de células. Crédito:© 2020 KAUST
p "Desenvolvemos um pipeline de análise de dados abrangente, que nos permite analisar os vários tipos de células que obtemos por esta abordagem e atinge alto poder estatístico e sensibilidade, "diz AbuElela." FMCR agora é usado em nosso laboratório para estudar a migração de várias células humanas, incluindo células-tronco, células imunes ativadas e células de câncer de mama. "
p Outra vantagem do novo procedimento é que antes ou durante o ensaio, um composto de teste, como um novo fármaco, pode ser adicionado às células para investigar o efeito do composto na adesão celular.
p "Esses estudos fornecem informações importantes sobre o efeito dos tratamentos sobre a migração e metástase das células e sobre como as drogas podem funcionar dentro do corpo, "observa Merzaban.