Um novo (e disponível gratuitamente) artigo de pesquisa original publicado antes da impressão em SLAS Discovery Online descreve uma nova metodologia que permite a investigação de um grande número de enzimas estruturalmente conservadas pertencentes à superfamília das dioxigenases dependentes de Fe (II) / 2-oxoglutarato. Esta superfamília compreende aproximadamente 60 enzimas que são responsáveis ​​por regular um grande número de processos biológicos, incluindo a regulação epigenética, Reparo de DNA / RNA e detecção de oxigênio. Destes, JumonjiC histona lisina desmetilases (JMJCs) e prolil hidroxilases são potenciais alvos de drogas devido à sua relevância para doenças humanas.

O succinato é um produto comum a todas as reações de dioxigenase dependentes de Fe (II) / 2-oxoglutarato. Um novo ensaio homogêneo por Alves et al. da Promega Corporation (Madison, WI) detecta succinato usando luminescência. Este ensaio permite aos cientistas caracterizar a atividade bioquímica de virtualmente qualquer enzima que produz succinato, independentemente da estrutura química do substrato. Isso demonstra a universalidade do ensaio e suas vantagens sobre os ensaios que geralmente dependem da modificação ou marcação do substrato ou do reagente necessário para capturar ou monitorar o produto.

Os autores apresentam uma série de aplicações para seu método. Usando um formato miniaturizado, eles caracterizam a atividade enzimática de várias histonas demetilases JumonjiC e outras dioxigenases, para os quais métodos de triagem de alto rendimento não estão disponíveis no momento. Usando este ensaio simples de detecção de succinato, os autores investigam as especificidades do substrato e determinam os parâmetros cinéticos aparentes para diferentes enzimas. Eles também validam o método como uma ferramenta de triagem para inibidores usando a biblioteca de compostos LOPAC 1280 e estudam o modo de ação de sucessos selecionados contra membros desta família de enzimas.

A detecção de succinato bioluminescente é resistente à interferência química e é eficaz para caracterizar dioxigenases dependentes de Fe (II) / 2-oxoglutarato com diversas estruturas de substrato em um único formato. Ao investigar um grande número dessas enzimas, este método pode ter um impacto significativo no campo da pesquisa da dioxigenase.