Sangue seco em papel de filtro armazenado para fins diagnósticos futuros - consideravelmente mais fácil do que hoje, método que consome recursos usando amostras de sangue congeladas em tubos de plástico. Em um novo estudo, Os pesquisadores de Uppsala mediram com sucesso 92 proteínas diferentes em círculos milimétricos perfurados em amostras secas. Eles mostraram que este método tem grande potencial para economizar recursos, em benefício do diagnóstico e tratamento precoces.

As amostras de sangue armazenadas são de extrema importância para encontrar marcadores de doenças que podem ser usados ​​para a detecção precoce de doenças, quando eles ainda são curáveis. Hoje, tubos de ensaio contendo volumes relativamente grandes (mililitros) de plasma sanguíneo são mantidos em grandes, freezers consumidores de energia a −80 ° C. O paciente deve primeiro ir a uma unidade de saúde onde uma enfermeira treinada obtém uma amostra de sangue venoso, que é enviado a um laboratório para separação centrífuga de plasma. A amostra pode então ser analisada e / ou salva em um biobanco para estudos futuros. Este método que consome recursos significa, por exemplo, que o Uppsala University Hospital atualmente salva apenas 1% de todas as amostras em um biobanco, enquanto o resto é descartado após uma análise inicial.

O novo método pode mudar radicalmente essa situação e ter um valor crucial para o desenvolvimento da saúde no futuro. O estudo mostra que muito pouco acontece às proteínas quando podem secar. Em muitos casos, eles permanecem completamente inalterados após 30 anos, ou mude apenas minimamente. Consequentemente, amostras secas podem ser usadas para exames de rotina dos serviços de saúde. Isso poderia ser realizado no setor de serviços laboratoriais de rápido crescimento, permitir que as pessoas tenham seu estado de saúde investigado sem envolver serviços médicos e de saúde. As amostras também podem ser usadas para criar biobancos de grande escala. Os custos no setor de saúde despencariam, mais amostras puderam ser analisadas e uma alta proporção de todas as amostras de sangue coletadas pôde ser salva.

"Isso tem várias implicações. Primeiro, você pode picar seu próprio dedo e enviar uma mancha de sangue seco pelo correio. Segundo, a um custo mínimo, será possível construir biobancos gigantescos de amostras obtidas em uma base clínica de rotina. Isso significa que as amostras podem ser coletadas antes do início clínico de uma doença, para identificar marcadores de valor para o diagnóstico precoce, melhorando o escopo do tratamento curativo, "diz Ulf Landegren, Professor de Medicina Molecular e chefe do grupo de pesquisa em Ferramentas Moleculares.

No presente estudo, os cientistas analisaram manchas de sangue seco (DBS). Alguns foram coletados recentemente, enquanto outros foram preservados por até 30 anos em biobancos na Suécia e Dinamarca que armazenam amostras de DBS retiradas de todos os bebês recém-nascidos para a triagem de cerca de 20 distúrbios metabólicos congênitos. Esses dois biobancos mantêm seu DBS em temperaturas diferentes:o sueco a + 4 ° C e o dinamarquês a −24 ° C. As amostras foram utilizadas para analisar os níveis de 92 proteínas relevantes em oncologia. Amostras de plasma úmido, mantido a -70 ° C por períodos correspondentes de tempo, também foram usados. Além disso, a fim de ser capaz de distinguir os efeitos do armazenamento de longo prazo, os pesquisadores examinaram o que acontece com a detecção de proteínas como um efeito do processo de secagem.

"Nossa conclusão é que podemos medir os níveis de 92 proteínas com altíssima precisão e sensibilidade usando a tecnologia PEA no minúsculo, discos perfurados de uma mancha de sangue seco. O processo de secagem real tem um efeito insignificante nas várias proteínas e o efeito é reproduzível, o que significa que pode ser incluído no cálculo, "diz Johan Björkesten, um estudante de doutorado na Universidade de Uppsala e o primeiro autor do estudo.

O interesse em usar biobancos para pesquisar proteínas ou moléculas de RNA que possam refletir dinamicamente a progressão da doença está crescendo rapidamente. Coletas de amostras compreendendo muitas amostras retiradas regularmente dos mesmos indivíduos são muito importantes para a identificação de biomarcadores desse tipo. Isso tem duas vantagens. Primeiro, hora extra, os indivíduos podem servir como seus próprios controles. Segundo, depois que uma pessoa adoece, as muitas amostras coletadas melhoram o escopo de localização de amostras de pacientes coletadas antes do início da doença, em uma fase em que o diagnóstico precoce pode ser particularmente valioso. Uma pré-condição para isso é a disponibilidade de um grande número de amostras, coletados regularmente de muitos indivíduos. Isso torna essencial que os custos de amostras individuais sejam baixos e todo o processo, da amostragem ao armazenamento, ser muito simples e, de preferência, não exigir o envolvimento de profissionais de saúde.

O uso de DBS oferece uma série de vantagens em relação ao uso de amostras "úmidas". Exemplos são o estresse mínimo para os pacientes, desde um pequeno, a punção autoadministrada no dedo é suficiente; os custos de coleta e armazenamento são baixos; nenhuma equipe altamente treinada é necessária para a amostragem; as amostras podem ser enviadas por carta; e as condições de armazenamento são simples. Uma das principais limitações das amostras secas, por outro lado, foi a pequena quantidade de sangue colhida, que exclui muitos métodos analíticos tradicionais.

O armazenamento de DBS de longo prazo afeta a detectabilidade de certas proteínas mais do que outras. A maioria das proteínas permanece completamente intacta após 30 anos, ou mude apenas minimamente, enquanto os níveis medidos de algumas proteínas diminuem de forma que metade da quantidade permanece após um período entre 10 e 50 anos. Os pesquisadores também descobriram que uma temperatura de armazenamento relativamente baixa é preferível para proteínas que são afetadas pelo armazenamento. Em comparação com o armazenamento de plasma úmido a −70 ° C, eles descobriram que isso preservou as proteínas melhor do que o armazenamento de DBS a -24 ° C. Esta parte da análise foi, Contudo, complicada por alguns fatores de confusão que tornaram a conclusão menos clara.

O método de ensaio de extensão de proximidade (PEA) permite a detecção de níveis de 96 proteínas (incluindo 4 controles) de um disco de 1,2 mm de diâmetro perfurado de uma mancha de sangue seco (DBS) em papel de filtro. ERVILHA, com base na pesquisa da Uppsala University, foi desenvolvido em um produto comercial, Proseek Multiplex, pela empresa de Uppsala Olink. A data, a empresa usou o método para analisar um quarto de milhão de amostras de plasma úmido.