O caldo nutriente líquido é usado para cultivar bactérias como Escherichia coli. As receitas para este caldo variam dependendo das espécies bacterianas e da presença de modificações genéticas, por exemplo, resistência a antibióticos. O caldo pode ser solidificado pela adição de ágar, o que permite que as bactérias formem colônias distintas, enquanto que na cultura líquida elas simplesmente se dispersam por todo o volume. Esta é uma técnica básica, mas essencial, para métodos avançados, como a clonagem de genes ou ensaios microbiológicos. Este artigo pressupõe que as cepas padrões de laboratório de Escherichia coli devem ser cultivadas em placas de ágar Luria (LB) (ou placas de petri).

Pesar 10 gramas de triptona de grau bacteriano, 5 gramas de extrato de levedura, 5 gramas de cloreto de sio, 15 gramas de agar ou agarose e 1 mililitro de hidrido de sio 1N. Misture-os com um volume de água destilada e esterilizada em autoclave até obter 1 litro de meio. Autoclave a mídia em frascos ou frascos com tampa frouxa por 25 minutos. Deixe esfriar a aproximadamente 50 graus Celsius antes de adicionar reagentes que serão destruídos em alta temperatura, como antibióticos ou outros suplementos nutricionais.

Deixe a mídia autoclavada esfriar a 50 graus Celsius e não inferior a 45 graus Celsius. , como o ágar irá definir em seu recipiente antes que ele possa ser derramado. Obtenha placas de petri estéreis e despeje o suficiente para cobrir toda a área da superfície da placa e pelo menos metade da sua profundidade. Evite o enchimento excessivo das placas e, de preferência, não permita que o agar entre em contato com a borda superior do prato. Permitir que as placas solidificar em um ambiente estéril (por exemplo, sob uma capa de fluxo laminar), deixando as tampas e para um canto do capô.

Secar as placas. Embora as placas possam ser usadas assim que são colocadas, alguma umidade estará presente na superfície do agar, o que impedirá que as colônias bacterianas se adiram suficientemente. Portanto, é melhor secar as placas antes de aplicar qualquer bactéria, por exemplo, deixando-as em temperatura ambiente por alguns dias ou por meia hora sob um capô de fluxo laminar ou em uma incubadora de 37 graus Celsius.

Armazene as placas. As placas secas devem ser empilhadas de cabeça para baixo (invertidas) em suas tampas e retornadas à sua embalagem original, com fita adesiva fechada e embrulhadas em folha para proteger da luz ou em um recipiente apropriado. Escreva sempre a data de preparação nas placas e evite usá-las se as placas tiverem mais de 2 meses de idade.

Dica

Execute o maior número possível de etapas acima (de preferência todas) possíveis um ambiente estéril (por exemplo, sob uma chama aberta ou uma capa de fluxo laminar) para evitar que contaminantes bacterianos transportados pelo ar entrem e cresçam na mídia.