Por Márcia Spear
Atualizado em 24 de março de 2022

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A coloração de Gram é uma técnica microbiológica fundamental que distingue bactérias Gram-positivas de Gram-negativas com base na estrutura da parede celular e na cor resultante. O álcool acetona desempenha um papel fundamental como agente descolorante, permitindo a diferenciação final da cor para revelar a identidade bacteriana.

Coloração Primária – Violeta Cristal

Após preparar um esfregaço bacteriano, o cristal violeta é aplicado por 30 segundos. Nesta fase, tanto as células Gram-positivas como as Gram-negativas aparecem uniformemente roxas. Uma breve lavagem com água remove o excesso de corante, embora algum cristal violeta permaneça ligado às espessas camadas de peptidoglicano das células Gram-positivas.

Mordante – Iodo

O iodo é adicionado por um minuto, funcionando como um mordente que se liga ao cristal violeta e forma um complexo insolúvel de cristal violeta-iodo. Este complexo adere fortemente ao robusto peptidoglicano das bactérias Gram-positivas, assegurando a coloração primária sem subsequente enxaguamento com água.

Descolorante – Álcool Acetona

Acetona ou álcool etílico são usados por 10 a 20 segundos para remover o complexo cristal violeta-iodo das células Gram-negativas. O álcool dissolve a membrana lipídica externa, permitindo que o corante escape da camada mais fina de peptidoglicano. Depois que o escoamento estiver incolor, um enxágue com água interrompe a ação descolorante. As células Gram-positivas retêm a coloração roxa, enquanto as células Gram-negativas tornam-se incolores.

Contracorante – Safranina

A Safranina é aplicada por aproximadamente um minuto para fornecer contraste, manchando de rosa as bactérias Gram-negativas, agora incolores. A máscara violeta cristalina mais escura garante que as células Gram-positivas permaneçam roxas. Um enxágue final com água remove o excesso de safranina.

Referências

• Manual do Laboratório de Microbiologia TCCD Campus Sul; Barry Chess et al., 2009