Por Chris Deziel Atualizado em 24 de março de 2022

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A coloração de uma amostra antes do exame microscópico aumenta principalmente a visibilidade, mas seus benefícios vão muito além do delineamento dos limites celulares.

Certos corantes permeiam as paredes celulares, iluminando estruturas internas e permitindo aos pesquisadores observar a atividade metabólica in situ.

Além disso, as manchas discriminam entre células viáveis e não viáveis.

Além disso, a coloração facilita a enumeração precisa de populações celulares específicas dentro de uma determinada biomassa.

Mais de 20 reagentes de coloração distintos estão disponíveis, cada um adaptado para um diagnóstico específico ou objetivo de pesquisa.

TL;DR

A coloração acentua as estruturas celulares; a seleção do reagente depende do objetivo analítico.

Tipos de manchas

A escolha do corante depende da característica específica que você deseja visualizar. Nem todas as colorações são compatíveis com células vivas, mas aquelas que o são – incluindo o marrom Bismarck, o vermelho tolueno, o azul do Nilo, o vermelho do Nilo e as fluorescentes de ligação ao DNA – são amplamente utilizadas em citologia e histologia.

Algumas manchas têm como alvo esporos, outras destacam lipídios ou proteínas, enquanto algumas mudam de cor na presença de amidos. Por exemplo, um médico que realiza um exame de Papanicolau aplicaria EosinaY, um corante fluorescente ácido que fica vermelho brilhante contra os glóbulos vermelhos, o citoplasma e as membranas celulares. A eosina Y também é usada rotineiramente na análise de aspirado de medula óssea.

Em muitos casos, uma única mancha é insuficiente. A hematoxilina, por exemplo, cora os núcleos de azul e, quando combinada com a eosina, produz um fundo vermelho ou rosa contrastante que faz com que os núcleos se destaquem nitidamente. A coloração combinada de hematoxilina-eosina (H&E) é um elemento básico em patologia para examinar a arquitetura do tecido.

Mancha de Gram

O procedimento de coloração de Gram é uma pedra angular da microbiologia clínica, permitindo a rápida identificação de patógenos bacterianos. A técnica emprega uma série de corantes que coram diferencialmente organismos Gram-positivos e Gram-negativos.

Primeiro, o cristal violeta é aplicado, colorindo todas as células com um violeta uniforme. Em seguida, o iodo atua como mordente, prendendo o corante nas espessas camadas de peptidoglicano das bactérias Gram-positivas – normalmente Staphylococcus e Streptococcus – de modo que o violeta permanece após a descoloração. Finalmente, um contracorante como o SafranineO confere uma tonalidade vermelha ou rosa às células Gram-negativas, criando um claro contraste entre os dois grupos.

Procedimento de coloração

A preparação da amostra pode envolver montagem a seco, montagem a úmido, corte ou esfregaço. Para a maioria dos protocolos de coloração, é preferível uma montagem húmida:coloque uma gota de água destilada na lâmina, posicione a amostra e cubra com uma lamela. Aplique uma gota da solução corante em um canto; a ação capilar atrai o corante pela amostra. Colocar uma toalha de papel no lado oposto da lâmina ajuda a absorver o excesso de líquido, garantindo uma distribuição uniforme. Assim que a mancha tiver penetrado totalmente, a lâmina estará pronta para avaliação microscópica.