Por Andy Pasquesi | Atualizado em 24 de março de 2022
CMB/Momento/GettyImages
A eletroforese em gel é uma técnica fundamental em biologia molecular que separa fragmentos de DNA por tamanho e os revela para análise. Ao incorporar amostras de DNA em uma matriz de gel de agarose e aplicar um campo elétrico, as fitas carregadas negativamente migram em direção ao ânodo, com fragmentos mais curtos viajando mais rápido do que os mais longos.
Visualização com Brometo de Etídio
O brometo de etídio (EtBr) é incorporado na mistura de agarose (pó de agarose, tampão EDTA, água). Uma vez que o gel polimeriza, o EtBr é distribuído uniformemente por toda a matriz. Depois de carregar amostras de DNA e rastrear corantes nos poços, o gel é submetido a uma voltagem controlada que atrai o DNA através dos poros.
À medida que as cadeias se movem, o EtBr intercala-se entre os pares de bases, ligando-se temporariamente ao DNA e transportando consigo o sinal de fluorescência. No final da corrida, cada fragmento absorveu uma quantidade substancial de EtBr. Iluminar o gel com um transiluminador UV excita o corante ligado, fazendo com que as bandas de DNA brilhem. Uma câmera calibrada captura a imagem para documentação.
Coloração alternativa com azul de metileno
Quando um transiluminador UV não estiver disponível, o gel pode ser corado com azul de metileno. Após a eletroforese, a imersão do gel durante a noite em uma solução de azul de metileno permite que o corante penetre na matriz e se ligue ao DNA por meio de ligações de hidrogênio. A coloração azul resultante é visível a olho nu, proporcionando uma alternativa simples e de baixo custo à fluorescência.
Rastreamento de corantes para estimativa de tamanho
Corantes de rastreamento – como azul de bromofenol e xileno cianol – são adicionados ao buffer de carga para monitorar o progresso sem interferir na migração do DNA. O azul de bromofenol se move a uma taxa equivalente a aproximadamente 300 nucleotídeos, enquanto o xileno cianol corresponde a aproximadamente 4.000 nucleotídeos. Ao comparar a posição de uma banda de DNA com esses marcadores, os técnicos podem estimar o tamanho do fragmento em pares de bases.
Em resumo, a eletroforese em gel acoplada a corantes apropriados de coloração e rastreamento permite a visualização e o dimensionamento precisos de fragmentos de DNA, formando a base de inúmeras análises genéticas.
