O diafragma de um microscópio normalmente está localizado abaixo da platina, onde controla a quantidade de luz que passa pela amostra e sobe pelo tubo do microscópio até a(s) ocular(es) ou câmera. É usado para ajustar o brilho e o contraste da imagem vista ao microscópio.

Alguns microscópios podem ter vários diafragmas, como um diafragma de campo e um diafragma de íris. Esses diafragmas podem ser ajustados para controlar o tamanho e a forma do feixe de luz, bem como a quantidade de luz que passa por ele, permitindo um controle mais preciso da qualidade da imagem e da visibilidade das características da amostra.