O procedimento de coloração de Gram, desenvolvido pelo cientista dinamarquês Hans Christian Gram em 1884, é um método amplamente utilizado para diferenciar dois grandes grupos de bactérias:bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. A técnica emprega corantes e reagentes específicos para determinar a composição química da parede celular bacteriana.

Geralmente, as bactérias Gram-positivas retêm o corante cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano em sua parede celular. Essa camada é responsável pela carga positiva, permitindo que essas bactérias retenham o complexo cristal violeta-iodo formado durante o processo de coloração. Posteriormente, as células Gram-positivas aparecem em roxo escuro ou azul quando observadas ao microscópio.

Por outro lado, as bactérias Gram-negativas possuem uma camada mais fina de peptidoglicano e uma membrana externa adicional. Esta diferença na estrutura da parede celular leva a uma perda do corante cristal violeta durante a etapa de lavagem com álcool do protocolo de coloração de Gram. Consequentemente, as bactérias Gram-negativas não retêm o complexo cristal violeta-iodo e subsequentemente absorvem o contracorante, normalmente safranina. Como resultado, as células Gram-negativas aparecem vermelhas ou rosadas quando observadas ao microscópio.

Embora o procedimento de coloração de Gram diferencie efetivamente entre bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, há algumas exceções em que o procedimento pode produzir resultados inesperados. Essas exceções incluem:

Bactérias ácido-resistentes:Algumas bactérias, como as pertencentes ao gênero Mycobacterium, possuem uma parede celular cerosa que impede que o corante violeta cristalino penetre nas células. Como resultado, essas bactérias não são facilmente visualizadas com o procedimento de coloração de Gram e requerem técnicas especiais de coloração, como a coloração de Ziehl-Neelsen, para serem observadas.

Bactérias Gram-variáveis:Certas espécies bacterianas podem apresentar variações nas suas características de coloração de Gram, dependendo das suas condições de crescimento ou estágios de desenvolvimento. Por exemplo, algumas bactérias podem ser Gram-positivas em certas fases do seu ciclo de vida e Gram-negativas em outras.

Bactérias com coloração incomum:Raramente, algumas espécies bacterianas podem apresentar resultados incomuns de coloração de Gram devido a composições únicas da parede celular ou variações em sua composição química. Estas bactérias podem parecer parcialmente coradas ou intermédias na sua reacção de coloração, tornando a sua classificação como Gram-positiva ou Gram-negativa um desafio.

Em resumo, o procedimento de coloração de Gram é uma técnica confiável que diferencia efetivamente entre a maioria das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas com base nas diferenças nas estruturas de suas paredes celulares. No entanto, existem excepções em que certas espécies bacterianas podem não estar em conformidade com os padrões típicos de coloração Gram-positiva ou Gram-negativa, exigindo métodos de coloração alternativos ou análise detalhada para uma classificação precisa.