O perclorato de sódio (NaClO4) desempenha um papel crucial no processo de isolamento do DNA genômico do sangue humano. Aqui estão suas principais funções:

1. Inibição de DNases :O sangue contém várias enzimas, incluindo nucleases, que podem degradar o DNA se não forem adequadamente inibidas. O perclorato de sódio atua como inibidor de DNases, principalmente daquelas que necessitam de magnésio ou cálcio para sua atividade. Ele se liga a esses íons metálicos, impedindo-os de participar de reações catalisadas por enzimas e protegendo o DNA da degradação.

2. Precipitação de Proteínas :O perclorato de sódio é comumente usado durante a etapa de precipitação de proteínas no isolamento do DNA. É adicionado a um lisado ou suspensão celular para induzir a precipitação de proteínas, incluindo a hemoglobina, que é abundante nos glóbulos vermelhos. A alta concentração de sal criada pelo perclorato de sódio perturba a solubilidade das proteínas, fazendo com que elas se agreguem e formem um pellet após a centrifugação. Isto permite que o sobrenadante contendo o DNA seja separado das proteínas precipitadas.

3. Precipitação de Ácido Nucleico :O perclorato de sódio também pode ser empregado para precipitar ácidos nucleicos, incluindo DNA genômico, do sobrenadante obtido após precipitação de proteínas. Isso é conseguido reduzindo a solubilidade das moléculas de DNA. Quando etanol ou isopropanol são adicionados ao sobrenadante juntamente com perclorato de sódio, o DNA torna-se insolúvel e forma um precipitado visível. Este precipitado pode ser recolhido por centrifugação e posteriormente purificado para obter ADN genómico puro.

4. Remoção de contaminantes :O perclorato de sódio auxilia na remoção de contaminantes como proteínas, outras macromoléculas e sais da preparação de DNA. A alta concentração de sal alcançada com o perclorato de sódio auxilia na precipitação eficiente de impurezas, deixando para trás o DNA purificado.

5. Otimização do rendimento e qualidade do DNA :O uso de perclorato de sódio no isolamento de DNA genômico pode otimizar tanto o rendimento quanto a qualidade do DNA extraído. Ao inibir eficazmente as DNases, evita a degradação do ADN, garantindo a integridade e o elevado peso molecular do ADN isolado. Além disso, a remoção eficiente de contaminantes melhora a pureza geral da preparação de DNA, tornando-a adequada para diversas aplicações posteriores de biologia molecular.

No geral, o perclorato de sódio desempenha um papel vital no isolamento do DNA genômico do sangue humano, inibindo as DNases, facilitando a precipitação de proteínas e ácidos nucleicos, removendo contaminantes e melhorando a qualidade e o rendimento do DNA isolado.