O ágar é uma substância gelatinosa derivada das paredes celulares purificadas das algas vermelhas. É adicionado aos meios microbiológicos, que são materiais nos quais os microrganismos são cultivados em laboratórios, a fim de fornecer uma estrutura mais sólida à substância. O ágar não tem valor nutricional; portanto, quando os cientistas o utilizam para cultivar microorganismos, eles adicionam vários nutrientes para aumentar o crescimento bacteriano em placas de Petri ou tubos de ensaio. Quando os pesquisadores armazenam bactérias em um tubo de ensaio, isso é chamado de inclinação do ágar, porque o meio de crescimento líquido solidifica enquanto o tubo está na posição inclinada. Um topo de tampa de rosca na inclinação impede que o ágar seque.
O meio é preparado de maneira diferente para inclinações e placas de Petri. A esterilização é feita com o ágar nos tubos; as placas de Petri são pré-esterilizadas antes que o ágar esterilizado seja derramado sobre elas. Meça a quantidade de água necessária e coloque-a em um balão Erlenmeyer. Aqueça no fogão até que esteja quase fervendo. Adicione outros ingredientes, se necessário, e mexa a mistura lenta e constantemente até que se dissolvam. Esses ingredientes podem incluir extrato de carne bovina, peptona e tampões de pH, dependendo do tipo de microrganismo que está sendo cultivado.
Antes de adicionar o pó de ágar desidratado, misture-o com uma pequena quantidade de água destilada fria para evitar grumos. Tenha cuidado ao adicionar ágar ao líquido quente, pois ele pode espumar e transbordar a panela. Adicione pequenas quantidades de agar de cada vez e mexa para distribuir uniformemente o ágar. Desligue o fogo quando a mistura começar a vapor, antes de ferver.
Coloque os tubos de teste sem tampa em um suporte para tubos de ensaio. Encha os tubos de ensaio transferindo cerca de 5 mililitros - cerca de 0,17 onça ou 1 colher de chá - do ágar derretido da panela usando uma pipeta estéril. Tampe frouxamente cada um dos tubos de ensaio, porque o ágar não será esterilizado se estiver bem vedado. Esterilize todos os tubos em uma autoclave por cerca de 25 minutos a 121 graus Celsius ou 250 graus Fahrenheit.
Quando o ágar ainda estiver quente, incline-o cuidadosamente o rack segurando os tubos de ensaio em uma superfície sólida ou em um livro grosso, certificando-se de que o meio dentro dos tubos esteja em uma posição inclinada em relação aos tubos de ensaio. Deixe o meio esfriar e solidificar nesse ângulo, o que aumenta a área da superfície do ágar. Aperte as tampas dos tubos de teste após o ágar esfriar. As inclinações estão prontas para uso quando o ágar se solidificar. Eles podem ser armazenados em temperatura ambiente ou na geladeira para uso futuro.
Inocule a inclinação transferindo células com um loop de inoculação de um microorganismo de colônia única na um prato para a superfície da inclinação. Mova o loop pela superfície da inclinação e volte a tapar os tubos. Incube a inclinação até que haja evidência de crescimento e coloque o tubo na geladeira.
