As bactérias são cultivadas em placas de Petri em um meio sólido conhecido como ágar bacteriano, onde colônias circulares elevadas se formam. Ao contrário de uma célula bacteriana individual, uma colônia é um grupo de bactérias grande o suficiente para ser visível a olho nu. O crescimento bacteriano pode ser medido pela simples observação de quantas colônias estão presentes; no entanto, métodos mais quantitativos incluem o uso de uma câmara de contagem ou, mais freqüentemente, contagens de placas viáveis. Este último é usado com mais frequência, pois também fornece informações qualitativas, como o efeito de diferentes condições de crescimento. Uma vez que pode haver bilhões de bactérias em uma placa de Petri, medindo primeiro requer diluição da amostra para que seja possível contar o número de colônias.

Em um tubo de teste, adicione 10 microlitros da cultura bacteriana inicial para 90 microlitros de meio de diluição. Feche bem a tampa do tubo e agite suavemente para obter uma mistura homogênea. Agora a amostra é um décimo da sua concentração original.

Transfira 10 microlitros desta nova amostra para um novo tubo de ensaio contendo 90 microlitros de meio de diluição, misture novamente. Mais uma vez, o resultado será a amostra mais diluída - agora será um centésimo de sua concentração original. Repita isso várias vezes até que a amostra original tenha sido diluída entre 10 e 10 vezes. Certifique-se de que cada tubo está etiquetado com a diluição correta, por exemplo 10 ^{-1, 10 -2 e assim por diante.}

Dispensar 10 microlitros da última diluição completada na placa de ágar. Usando a borda de espalhamento, distribua a solução bacteriana por toda a superfície da placa de ágar. Repita isso para mais dois pratos. Também é comum executar essas etapas com outros níveis de diluição para comparação. Certifique-se de rotular as partes inferiores das placas. Substitua as tampas em cada placa e deixe as placas de ágar secar por vários minutos ou em uma bancada de laboratório sob uma chama, ou em uma incubadora. Coloque as placas na incubadora, que deve ser ajustada para a temperatura adequada para a tensão das bactérias. Deixe crescer por 12 a 16 horas.

As colônias devem estar visíveis após 16 horas; no entanto, algumas modificações genéticas podem exigir mais tempo (por exemplo, desenvolvimento de cor). Quando as colônias são observáveis, retire as placas e encontre aquelas que tenham entre 30 e 300 colônias. Usando um marcador permanente, coloque um ponto no fundo da placa de petri - o lado com o ágar, não a tampa - onde quer que uma colônia seja visível através do ágar. Conte cada ponto marcador. Repita para cada prato.

Para medir a quantidade de bactérias na cultura de partida para este experimento, a diluição precisa ser revertida nos cálculos, em dois lugares. Em primeiro lugar, quando você tomou um microlitro do tubo de ensaio para colocar na placa de Petri, você tomou um décimo da amostra diluída, então você precisa multiplicar tudo por 10 para reverter isso. Além disso, se o fator de diluição no tubo de ensaio fosse, por exemplo, 10 ^{-7, então o número de colônias deveria ser multiplicado por 10 7 para reverter o efeito de diluição. Basta remover o sinal negativo do expoente nos cálculos. Use a fórmula:}

[Número de colônias contadas] × 10 × [quantas vezes a amostra deve ser multiplicada para chegar à concentração original: por exemplo, 10 ^{5] = Número de unidades formadoras de colônia (CFU) por mililitro de cultura inicial. Este é o crescimento bacteriano em suas placas de Petri.}

TL; DR (muito longo; não leu)

Assegure-se de esterilizar o difusor de vidro mergulhando a borda em 70% de etanol e inseri-lo em uma chama de bico de Bunsen. Deixe o etanol pegar fogo e queimar lentamente o álcool, o que matará toda a contaminação bacteriana. Suavemente, toque-o na parte seca (isto é, sem bactérias) do ágar para resfriá-lo - o ágar não deve derreter ao contato.

Aviso

Trate qualquer bactéria como se fosse potencialmente patogênico, e use procedimentos apropriados de segurança de laboratório.