ácido desoxirribonucleico e proteínas. O DNA é organizado em unidades chamadas genes, cada um dos quais codifica uma sequência específica de RNA ou proteína. Os genes são estudados para aprender sobre estrutura biológica e função, evolução, doença e muitos outros aspectos dos sistemas vivos. Para estudar genes em detalhes, o DNA deve ser isolado e purificado de células de interesse.

Extração de DNA

Embora o DNA de uma única célula possa ser extraído e estudado, não é suficiente ver com o olho nu. Para obter uma quantidade suficiente para o spool, quanto mais células você tiver para trabalhar melhor (muitos milhões).

Os protocolos exatos variam consideravelmente para explicar as características únicas de amostras específicas, mas as etapas gerais são a homogeneização, lise, digestão, separação e coleta. O procedimento é melhor realizado em um pequeno (dependendo do tamanho da amostra) tubo de vidro ou plástico.

Uma amostra é geralmente misturada ou moída para separar completamente as células umas das outras. Isso torna os ingredientes das células mais acessíveis aos reagentes que se seguem. Detergente ou enzimas são então adicionados ao homogeneizado para lisar as membranas celulares (e membranas nucleares se as células forem eucarióticas) para liberar o DNA. Neste ponto, o DNA é cercado por proteínas, lipídios, carboidratos - todo o resto que estava contido nas células.

Uma digestão enzimática adicional pode ser necessária para decompor as proteínas para que elas não se liguem ao DNA. e interferir com sua coleção. O ADN é separado do resto do conteúdo celular adicionando álcool frio, puro, etílico ou isopropílico. O DNA não é solúvel nesses álcoois, então ele irá se condensar para tentar minimizar seu contato com o álcool. Os DNAs condensados ​​s ent recolhidos, usualmente por centrifugao --- ou spooling.

DNA Spooling

A recolha de DNA por spooling eficaz quando uma grande quantidade de DNA obtida a partir de um procedimento de extraco. É também um excelente método de demonstração, pois um impressionante emaranhado de DNA puro é claramente visível.

Para enrolar o DNA, a etapa de separação deve ser realizada com cuidado. Se não fazia parte da mistura de reagentes de lise previamente adicionada, uma solução salina concentrada (cloreto de sódio) deve ser adicionada à solução antes da etapa de adição de álcool. O álcool frio é derramado lentamente pelo lado do tubo de ensaio para formar uma camada no topo da solução aquosa, evitando a mistura. Se feito corretamente, o álcool formará sua própria camada em cima da camada salgada. Em seguida, vem o spool.

Para coletar o DNA da camada salgada, coloque cuidadosamente uma vareta de vidro na camada de álcool até que ela toque o fundo do tubo. Lentamente gire a haste entre os dedos, enquanto observa a interface entre as duas camadas. Se DNA suficiente estiver presente, ele se agregará na interface entre camadas para formar uma massa translúcida leitosa. Gire a vareta para envolver o DNA em torno dele (que é a parte de spooling) e puxe-o para fora do tubo. O DNA pode ser transferido para outro tubo de álcool puro para armazenamento ou análise posterior.