Como é o caso ao usar qualquer instrumento científico, você precisa ter certeza de que o instrumento está em boas condições de funcionamento antes de usá-lo para analisar uma amostra. Verificar a resposta do instrumento para uma amostra conhecida verifica se o instrumento está adequadamente calibrado. Espectrofotômetros requerem calibração periódica para garantir a resposta correta do instrumento. Os espectrofotômetros de infravermelho (IV) usam o poliestireno como padrão de calibração. Uma varredura do instrumento com um pedaço de poliestireno no suporte da amostra verificará a presença de picos vistos nos espectros de infravermelho e a intensidade relativa dos picos.

Ligue o espectrofotômetro e deixe-o aquecer por pelo menos 10 minutos. O tempo de aquecimento é necessário para a fonte se estabilizar. Sem uma fonte estável, você não pode confiar nos espectros obtidos. O sinal analítico depende da atenuação da fonte de radiação pela amostra.

Execute o padrão de calibração colocando um pedaço de filme de poliestireno no porta-amostras. Sem um teste usando uma amostra de espectros conhecidos chamada padrão, você não tem certeza de que o espectrofotômetro esteja funcionando corretamente.

Recupere os espectros para a amostra de poliestireno. Compare os espectros com aquele em uma referência padrão de espectros IR. Certifique-se de que todos os picos esperados existam nos espectros de teste. A localização dos picos deve se alinhar com o comprimento de onda de absorção.

Verifique os espectros para se certificar de que a força do sinal está dentro de 95 por cento do máximo para o pico mais forte. Se o pico mais forte no espectro for maior ou menor que a escala total, ajuste a atenuação para fornecer a intensidade correta do sinal.

Calibre o espectrofotômetro de infravermelho frequentemente. Uma frequência mínima de calibração deve incluir uma varredura antes e outra logo após o seu trabalho do dia.