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  • Microscopia de fluorescência na mais alta resolução espacial e temporal
    p Crédito:ACS

    p Os pesquisadores do LMU simplificam o microscópio MINFLUX e têm conseguido diferenciar moléculas que são extremamente próximas umas das outras e rastrear sua dinâmica. p Apenas alguns anos atrás, um limite de resolução aparentemente fundamental na microscopia óptica foi superado - um avanço que em 2014 levou ao Prêmio Nobel de Química para microscopia de super resolução. Desde então, houve outro salto quântico nesta área, o que reduziu ainda mais o limite de resolução para o nível molecular (1 nm).

    p Cientistas da LMU Munique e da Universidade de Buenos Aires agora conseguiram discriminar entre moléculas extremamente próximas e até mesmo rastrear sua dinâmica independentemente umas das outras.

    p Isso foi alcançado pelo novo método p-MINFLUX, refinando e simplificando o microscópio MINFLUX recentemente desenvolvido, necessário para resolução de 1 nm. Funções adicionais também permitem distinguir os tipos de moléculas observadas. O método p-MINFLUX consulta a localização de cada molécula marcada com fluorescência, colocando um foco de laser próximo à molécula. A intensidade da fluorescência serve como medida da distância entre a molécula e o centro do foco do laser. A posição exata da molécula pode então ser obtida por meio de triangulação, alterando sistematicamente o centro do foco do laser em relação à molécula.

    p Tempo de vida da fluorescência de corantes em microscopia confocal convencional (grande) e usando p-MINFLUX. Crédito:F. Steiner

    p Os grupos liderados pelo Professor Philip Tinnefeld (LMU) e Professor Fernando Stefani (Buenos Aires) intercalaram os pulsos de laser no tempo para que pudessem alternar entre as posições focais na velocidade máxima possível. Além disso, usando eletrônica rápida, uma resolução temporal na faixa de picossegundos foi alcançada, que corresponde a transições eletrônicas dentro das moléculas. Em outras palavras, os limites do microscópio são determinados exclusivamente pelas propriedades de fluorescência dos corantes usados.

    p Na presente publicação, os cientistas conseguiram mostrar que o novo método p-MINFLUX permite a distribuição local do tempo de vida da fluorescência - a variável medida mais importante para caracterizar o ambiente dos corantes - com uma resolução de 1 nm. Philip Tinnefeld explica:"Com o p-MINFLUX será possível descobrir estruturas e dinâmicas a nível molecular que são fundamentais para a nossa compreensão dos processos de transferência de energia até as reações biomoleculares."

    p Este projeto foi financiado pela Fundação Alemã de Pesquisa (Cluster of Excellence e-conversion, SFB1032), o Conselho de Pesquisa Científica e Tecnológica (CONICET) e a Agência Nacional de Fomento à Pesquisa, Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (ANPCYT) na Argentina. O Prof. Stefani é o vencedor do Prêmio Georg Forster da Fundação Alexander von Humboldt e, neste papel, um cientista convidado regular em físico-química na LMU Munique.


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