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  • Os pesquisadores usam substrato de ouro para permitir a cromicroscopia eletrônica em proteínas difíceis

    Micrografia óptica de um substrato de ouro ultraestável que melhora a resolução de imagem de criomicroscópios eletrônicos. Cada buraco, que é usado para apoiar amostras congeladas no vácuo do microscópio eletrônico, tem aproximadamente um micrômetro de diâmetro. Crédito:Christopher Russo, MRC-LMB

    (Phys.org) - Uma dupla de pesquisadores do Laboratório de Biologia Molecular do Conselho de Pesquisa Médica da Universidade de Cambridge, no Reino Unido, encontrou uma maneira de superar o problema do movimento de muitas proteínas ao tentar estudá-las usando a cromicroscopia eletrônica. Em seu artigo publicado na revista Ciência , Christopher Russo e Lori Passmore descrevem como criaram uma estrutura de suporte baseada em um substrato de ouro que parece resolver o problema.

    Como a dupla de pesquisa observou, até agora tem sido difícil aprender mais sobre muitas proteínas usando a criomicroscopia eletrônica porque elas se movem sob o feixe, o que resulta em imagens borradas e dificuldade em fazer medições. Eles explicam ainda que a razão pela qual isso ocorre é por causa das instabilidades nos substratos de carbono geralmente usados ​​para apoiar as amostras sob o microscópio (que são congeladas para aumentar a estabilidade). Neste novo esforço, os pesquisadores descrevem sua nova técnica, que eles acreditam oferecer uma maneira de contornar este problema, introduzindo substratos de suporte feitos de ouro. Eles formaram uma estrutura de suporte que era mais ou menos semelhante àquelas baseadas em substratos de carbono, em seguida, estenderam uma película de ouro de apenas 500 angstroms de espessura sobre um suporte de rede quadrada - eles terminaram colocando as proteínas congeladas em orifícios de 1,2 micrômetro que haviam feito no filme. O filme e o suporte de ouro, eles notaram, garantiu condutividade elétrica uniforme e contração térmica enquanto as amostras de proteína eram congeladas.

    A dupla de pesquisa sugere que o ouro se presta à aplicação por várias razões - é altamente resistente à radiação e, portanto, mais estável, é quimicamente inerte e ao mesmo tempo biocompatível e eletricamente condutor.

    Para testar seu processo, eles escanearam a apoferritina, uma proteína com um complexo esférico que se mostrou excepcionalmente difícil de estudar com a criomicroscopia eletrônica, usando a técnica antiga e a nova que desenvolveram. Eles relatam que durante o teste com o substrato de ouro, a amostra exibiu muito pouco movimento, (tanto no plano vertical quanto no plano do objeto) permitindo que imagens muito melhores sejam obtidas do que elas eram capazes de obter quando usavam um substrato de carbono. Eles também relatam que, devido ao movimento reduzido, eles foram capazes de se aproximar da amostra enquanto as varreduras eram feitas. Eles acreditam que seu método provavelmente funcionará com uma série de outras proteínas, o que deve manter outros pesquisadores ocupados por um longo tempo.

    Renderização artística de um substrato de ouro ultraestável que melhora a resolução de imagem de criomicroscópios eletrônicos. Cada buraco, que é usado para apoiar amostras congeladas no vácuo do microscópio eletrônico, tem aproximadamente um micrômetro de diâmetro. Crédito:Lesley McKeane / Christopher Russo, MRC-LMB

    © 2014 Phys.org




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