Os cientistas usam diluições seriadas (uma série de diluições 1:10) para calcular a densidade populacional das culturas bacterianas. Quando uma gota de cultura contendo um pequeno número de bactérias é banhada e incubada, cada célula teoricamente estará longe o suficiente de outras células para formar sua própria colônia. (Na verdade, algumas colônias podem ser descendentes de duas células próximas, mas isso é raro em culturas diluídas, e assim o número de colônias é uma estimativa muito boa do número de células originalmente transferidas para a placa.) Como a densidade populacional é desconhecido, uma variedade de diluições deve ser usada para terminar com uma placa com um número apropriado de colônias.

Diluições em série

Etiquete os seis tubos de ensaio (cada um contendo 9 mL de de 1 a 6. Etiquete as seis placas de ágar como 1 a 6. Use um pipetador e pontas de pipeta estéril de 1 mililitro (mL) para transferir 1 mL de cultura bacteriana para o tubo 1.

Misture bem e transfira 1 mL do tubo 1 para o tubo 2 usando um pipetador e pontas estéreis de 1 mL.

Repita o Passo 2 para os tubos restantes, cada vez transferindo 1 mL do tubo usado mais recentemente para o próximo tubo.

Use um pipetador e pontas estéreis de 0,1 mL para transferir 0,1 mL do tubo 1 para uma placa de ágar. Chame uma vareta de vidro em forma de L e use-a para espalhar a gota uniformemente ao redor da placa. Incubar a placa por 48 horas a uma temperatura adequada para as bactérias que estão sendo usadas. Diferentes tipos de bactérias têm temperaturas de crescimento ótimas diferentes. Se você não encontrar a temperatura ideal de crescimento usando o material de referência, tente incubar as placas a 25 e 37 graus.

Repita o passo 4, cada vez transferindo líquido de um tubo de ensaio diferente para a placa correspondente. h2> Cálculos de população

Observe as seis placas e escolha aquela com 30 a 200 colônias isoladas.

Multiplique o número de colônias na placa por 10 para calcular o número de células por mL de cultura do tubo de diluição usado.

Multiplique o número do Passo 2 por 10 ^ (número da placa) para calcular o número de células por mL da cultura original. O valor de 10 ^ (número da placa) é o fator de diluição da cultura usada para inocular essa placa.

Dica

Inclua todos os nutrientes necessários nas placas de ágar. As bactérias auxotróficas requerem certos aminoácidos, além dos ingredientes básicos da mídia. Auxotrophs diferentes têm diferentes necessidades de nutrientes. Consulte o material de referência para descobrir quais aminoácidos, se houver, suas bactérias precisam.

Espere um segundo entre queimar a vareta de vidro e usá-la, para não queimar as bactérias.

Aviso

Use sempre luvas de laboratório quando manusear bactérias.