Íons de cálcio (ca
2+
) são
não usado para induzir competência artificial em bactérias.
em vez disso, cloreto de cálcio (CACL 2 ) é usado. Aqui está o porquê:
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facilitar a captação de DNA: CACL
2 O tratamento torna as células bacterianas mais permeáveis ao DNA, permitindo que elas ocupem o DNA exógeno com mais eficiência. O mecanismo envolve:
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desestabilização da membrana celular: Ca
2+
Os íons interagem com os grupos de cabeça de fosfolipídios carregados negativamente da membrana celular, causando uma ligeira desestabilização. Isso torna a membrana mais "com vazamento" e permite que o DNA entre.
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Escudo do DNA: O CA
2+carregado positivamente
Os íons neutralizam as cargas negativas no DNA, impedindo que ele seja repelido pela membrana celular carregada negativamente.
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facilitar a ligação ao DNA: CACL
2 O tratamento também pode promover a ligação do DNA à superfície celular bacteriana, facilitando a captação.
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choque térmico: Após CACL
2 Tratamento, as bactérias são submetidas a um breve choque térmico (normalmente 42 ° C por 1-2 minutos). Esse choque térmico interrompe ainda mais a membrana celular e permite que o DNA entre na célula.
Por que não os íons de cálcio sozinhos?
Embora os íons cálcio desempenhem um papel no mecanismo, usá -los por si só não seria eficaz. O cloreto de cálcio fornece a concentração necessária de íons de cálcio e também ajuda a manter o equilíbrio osmótico da célula.
em resumo:
O cloreto de cálcio é usado para competência artificial em bactérias porque facilita a captação de DNA desestabilizando a membrana celular, protegendo o DNA da repulsão e promovendo a ligação ao DNA. A etapa de choque térmico aumenta ainda mais a entrada do DNA.
