A função principal do detergente líquido, normalmente Dodecil Sulfato de Sódio (SDS), no isolamento de DNA é lisar as membranas celulares e facilitar a liberação de componentes celulares, incluindo DNA, na solução. Aqui estão as principais funções do detergente líquido no isolamento do DNA:

Lise Celular:SDS, um detergente aniônico, rompe a bicamada fosfolipídica das membranas celulares ao interagir com as caudas hidrofóbicas dos fosfolipídios. Essa interação leva à desintegração da membrana, fazendo com que a célula se abra e libere seu conteúdo.

Solubilização de componentes celulares:Após a lise celular, o SDS ajuda a solubilizar e manter a solubilidade de vários componentes celulares, incluindo proteínas e lipídios, desnaturando-os e evitando sua agregação. Isto garante que o DNA permaneça acessível e facilita as etapas subsequentes do processo de isolamento.

Desnaturação de Proteínas:O SDS tem a capacidade de desnaturar proteínas, o que é crucial para o isolamento do DNA. As proteínas se ligam fortemente ao DNA e podem dificultar sua extração. Ao desnaturar as proteínas, o SDS interrompe essas interações proteína-DNA, permitindo a separação eficiente do DNA de outros componentes celulares.

Acessibilidade do DNA:A desnaturação das proteínas também expõe as moléculas de DNA, tornando-as mais acessíveis às enzimas e reagentes utilizados nas etapas subsequentes do protocolo de isolamento do DNA.

Complexos SDS-Proteína:O SDS forma micelas, que são estruturas esféricas com um interior hidrofóbico e um exterior hidrofílico. As proteínas desnaturadas ligam-se às regiões hidrofóbicas das micelas de SDS, formando complexos que as mantêm em solução e evitam a sua interferência na purificação do DNA.

Precipitação de ácido nucleico:Em alguns métodos de isolamento de DNA, como o método CTAB (brometo de cetil trimetil amônio), o SDS pode ser usado para aumentar a precipitação de ácidos nucleicos. Forma complexos com CTAB, que por sua vez se liga à estrutura do DNA com carga negativa, promovendo a formação de precipitados densos de ácido nucleico-detergente que podem ser facilmente sedimentados por centrifugação.

É importante notar que o SDS pode inibir a actividade de algumas enzimas, tais como enzimas de restrição, pelo que a sua concentração e a duração da exposição ao ADN precisam de ser cuidadosamente controladas durante o procedimento de isolamento do ADN para evitar a degradação do ADN.