O vírus influenza A, responsável por surtos de gripe sazonal, também é o único vírus influenza que já causou pandemias de gripe. Isso torna a gripe A um importante tópico de pesquisa, pois a gripe sazonal causa entre 290.000 e 650.000 mortes por ano em todo o mundo. Como o vírus da gripe A está em constante mudança ou mutação, pode ser difícil detectar, tratar e inocular. Para resolver esse problema, os pesquisadores estão procurando por partes do vírus da gripe que não mudam quando o vírus sofre mutação. Uma estrutura panhandle no vírus conhecida como região promotora ou promotor surgiu como um alvo potencial.
Para detectar rapidamente a presença do vírus influenza A, os pesquisadores desenvolveram uma sonda fluorogênica que poderia se ligar à região promotora do RNA do vírus influenza A. Uma sonda fluorogênica é baseada em pequenas moléculas chamadas fluoróforos que emitem luz quando um alvo específico está presente. Neste estudo, a sonda fluorogênica que os pesquisadores criaram se liga a parte da região promotora que consiste em uma estrutura de RNA de fita dupla que transporta a alça interna, criando uma resposta de iluminação significativa que pode identificar a presença de influenza A.

A técnica foi apresentada em um artigo publicado em 23 de maio na revista Analytical Chemistry .

"A região promotora do RNA do vírus influenza A surgiu como um novo alvo para aplicação bioquímica e terapêutica porque as sequências não estão envolvidas nas variações genéticas relacionadas à patogênese (como o vírus da gripe se desenvolve) e resistência antiviral", disse Yusuke Sato, um professor associado da Universidade de Tohoku. "Esses resultados representam o desenvolvimento de novas sondas moleculares para a pesquisa da influenza A, com vistas ao diagnóstico da infecção por influenza A, bem como o projeto de novos medicamentos antivírus visando a região promotora do RNA do vírus influenza A".

Para criar a sonda fluorogênica, os pesquisadores usaram um tipo de DNA sintético chamado ácido nucleico peptídico (PNA). O PNA formador de triplex pode ser desenvolvido especificamente para direcionar o RNA de fita dupla na estrutura panhandle do RNA do vírus influenza A de maneira seletiva de sequência. Os pesquisadores então combinaram o PNA formando triplex com um tipo de corante chamado laranja de tiazol com uma pequena molécula que se ligaria à estrutura de alça interna do RNA.

Essa combinação é chamada de conjugado. Para determinar a eficácia do conjugado, os pesquisadores analisaram primeiro o quão brilhante o conjugado brilhava quando estava ligado à estrutura de panhandle alvo da região promotora. Era mais de 130 vezes mais brilhante do que quando não estava ligado a nada. Em comparação com as pequenas moléculas sozinhas, a combinação do PNA e as pequenas moléculas tiveram uma afinidade de ligação mais forte em duas ordens de magnitude. Este resultado mostra o quão promissora esta técnica pode ser para o diagnóstico de influenza A, uma vez que a região promotora permanece estável independente da cepa de influenza.

"O grupo de pesquisa demonstrou a resposta de fluorescência seletiva do conjugado para o RNA total das células infectadas pelo vírus influenza A H1N1 em relação às células infectadas de forma simulada", disse Sato. "Esta técnica serviria como um candidato promissor para a análise do RNA do vírus influenza A com base na detecção direta da região promotora do RNA do vírus influenza A, em nítido contraste com o método de PCR padrão-ouro".

À medida que o mundo fica de olho na pandemia de COVID-19 em andamento, os pesquisadores estão ansiosos para encontrar soluções agora para futuros surtos de influenza A. Ao encontrar novas maneiras de atingir partes específicas do vírus influenza A que não mudam quando o vírus sofre mutação, esta pesquisa poderia ser usada para criar testes mais sensíveis que podem detectar o vírus influenza A mais facilmente. No futuro, isso pode até ser um alvo promissor para medicamentos antivirais que podem tratar infecções por influenza A. + Explorar mais

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