Os recentes avanços na tecnologia de imagem tornaram possível visualizar a dinâmica intracelular, o que oferece uma melhor compreensão de vários princípios biológicos fundamentais para acelerar o desenvolvimento terapêutico. A marcação fluorescente é uma dessas técnicas que é usada para identificar proteínas intracelulares, sua dinâmica e disfunção. Tanto sondas internas quanto externas com corantes fluorescentes são usadas para este propósito, embora sondas externas possam visualizar melhor as proteínas intracelulares em comparação com as sondas internas. No entanto, sua aplicação é limitada pela ligação não específica a componentes intracelulares, resultando em uma baixa sinalização específica do alvo e maior ruído de fundo.
Recentemente, um imunossensor marcado com corante fluorescente conhecido como Quenchbody (Q-body) tem sido usado com sucesso para detectar antígenos em soluções ou na superfície celular. Um corpo Q é essencialmente um fragmento de anticorpo com a capacidade de se ligar a um antígeno específico.

Contra esse pano de fundo, pesquisadores do Japão e Cingapura, liderados pelo Prof. Hiroshi Ueda do Instituto de Tecnologia de Tóquio (Tokyo Tech), Japão relataram recentemente a aplicabilidade de corpos Q para imagens de proteínas intracelulares em células vivas. Suas descobertas estão agora publicadas em Chemical Science .

"Uma vez que o Q-body funciona como uma ferramenta de imagem específica do local e dependente de antígeno, nós hipotetizamos que ele exibirá fluorescência comutável dependente de antígeno ao interagir com a proteína alvo, permitindo uma visualização precisa da dinâmica intracelular. Demonstramos isso sintetizando um Q-body para p53, uma proteína biomarcadora supressora de tumor que desempenha um papel importante no reparo do DNA, divisão celular e morte celular”, explica o Prof. Ueda.

A equipe sintetizou um corpo Q marcado com corante fluorescente "duplo" chamado "C11_Fab Q-body", que apresentou melhor sensibilidade e especificidade do alvo quando comparado a sondas convencionais em células cancerígenas humanas que expressam p53. Uma vez que a expressão de p53 aumenta em células cancerosas, eles eletroporaram o corpo Q em várias linhagens de células cancerígenas humanas para validar sua hipótese.

Em comparação com uma sonda tradicional que exibiu sinais de fluorescência contínuos mesmo na ausência de p53, a sonda Q-body exibiu sinais de fluorescência em células "fixas" (células com proteínas desnaturadas para interromper a decomposição) expressando p53. Além disso, a sonda Q-body pode visualizar tanto o tipo selvagem (controle) quanto o mutante p53 em amostras de células fixas.

Além disso, a equipe observou sinais de fluorescência com intensidade 8 vezes maior em linhas de células de câncer de cólon humano vivo com expressão de p53 em comparação com os negativos. Curiosamente, o corpo Q foi estável a longo prazo, exibindo mudanças de intensidade de fluorescência com mudanças induzidas experimentalmente nos níveis de p53.

A citometria de fluxo revelou maior imunofluorescência com Q-body em células expressando p53. Além disso, na triagem, a razão e o sinal de fluorescência dessas células foram significativamente maiores quando comparadas às demais (com ou sem corpo Q).

Prof. Ueda diz:"As técnicas existentes são incapazes de fornecer imagens precisas de alvos intracelulares menos abundantes com alta especificidade e sensibilidade. Neste contexto, nosso estudo demonstra o potencial de Q-corpos em imagens de células vivas para melhor visualização de alterações intracelulares dinâmicas , e fornece uma abordagem para a classificação específica do antígeno intracelular de células vivas usando um corpo Q."

Olhando para o futuro, podemos esperar o desenvolvimento de muito mais Q-corpos para visualizar vários outros biomarcadores intracelulares, abrindo portas para um melhor desenvolvimento terapêutico baseado em células e pesquisa de câncer. + Explorar mais

Lançando uma nova luz:um novo tipo de imunossensor para testes de imunoensaio