A coloração de Gram é um procedimento de coloração diferencial que mostra quais bactérias são Gram-positivas ou Gram-negativas com base em sua coloração. O álcool acetona é um reagente usado neste processo para fornecer a diferenciação da cor. As bactérias gram-positivas têm uma camada espessa de peptidoglicano e coram de roxo, enquanto os microrganismos Gram-negativos têm pouca ou nenhuma camada de peptidoglicano e coram de rosa.

Primária Violeta de Cristal de Mancha -

Uma vez um slide de Uma amostra bacteriana é preparada, violeta de cristal é usada para manchar a amostra primeiro. Neste ponto, as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas aparecerão roxas. Normalmente, o cristal violeta é aplicado no slide por 30 segundos antes de remover qualquer excesso de mancha com água. O cristal violeta pode aderir um pouco às camadas de peptidoglicano para que nem toda a mancha primária seja lavada com a água.

Iodo-Mordente

O iodo é então adicionado à amostra por um minuto. . Ele atua como um mordente, que serve para fixar corantes em um processo de coloração. O iodo desempenha essa função ligando-se ao violeta de cristal e criando um complexo insolúvel que adere muito melhor à espessa camada de peptidoglicano encontrada em células bacterianas Gram-positivas do que apenas o cristal violeta sozinho. Não há uma etapa de lavagem com água após a adição do iodo.

Decolorizer-Alcohol of

Tanto a acetona como o álcool etílico podem ser usados ​​como agente descolorante. O álcool dissolve os lipídios encontrados na membrana celular externa das bactérias Gram-negativas, permitindo que o complexo de cristal-iodo-violeta vaze da camada de peptidoglicano mais fina. O álcool é adicionado por 10 a 20 segundos; Ele é derramado no escorregador até que todo o iodo seja lavado e o escoamento seja incolor. Neste ponto do processo de coloração de Gram, as bactérias Gram-negativas são incolores, enquanto as bactérias Gram-positivas ainda retêm o cristal violeta. Uma vez terminado o slide precisa ser enxaguado com água para parar o efeito de descoloração.

Safranin Counter-control

Safranin é então adicionado para aumentar a visibilidade e contraste com as bactérias Gram-negativas incolores. A mancha faz com que essas bactérias pareçam rosa sob o microscópio. Uma vez que a mancha é adicionada a toda a amostra, também mancha bactérias Gram-positivas, mas o mais escuro do cristal violeta esconde a cor rosa safranina mais clara. Uma vez que a amostra de slides tenha sido inundada com safranina por cerca de um minuto, a água é usada para lavar qualquer excesso de mancha que não aderiu às células bacterianas.