Os cientistas usam uma variedade de enzimas para ligar um novo gene ao DNA plasmídico, mas os mais importantes são:

* Enzimas de restrição: Essas enzimas agem como uma tesoura molecular, cortando o DNA em sequências específicas. Eles são cruciais para criar fins compatíveis no plasmídeo e no gene de interesse.
* ligase: Essa enzima age como cola molecular, juntando -se às extremidades cortadas do plasmídeo e do gene, formando um plasmídeo recombinante.

Vamos quebrar o processo:

1. Restrição Digest: O plasmídeo e o gene de interesse são cortados com a mesma enzima de restrição. Isso cria extremidades pegajosas compatíveis, que são saliências curtas e de fita simples que podem par-par de base entre si.
2. ligação: O plasmídeo e o gene de corte são misturados com a enzima ligase. A ligase se junta às pontas pegajosas, formando um plasmídeo circular contendo o novo gene.

Outras enzimas importantes:

* polimerase de DNA: Essa enzima pode ser usada para preencher lacunas no DNA, principalmente se o resumo de restrição criar pontas robustas (sem saliência pegajosa).
* fosfatase alcalina: Essa enzima pode ser usada para impedir a auto-ligação do plasmídeo, o que pode acontecer se o plasmídeo for cortado com apenas uma enzima de restrição.

em resumo: A combinação de enzimas de restrição e ligase são os principais players na inserção de um novo gene em um plasmídeo. Outras enzimas podem ser usadas, dependendo dos detalhes específicos do processo de clonagem.