O método usado para introduzir um gene no genoma do cloroplasto é chamado de transformação cloroplasta . Este método envolve as seguintes etapas:

1. Construindo um vetor de transformação: Um vetor que contém o gene desejado é criado, juntamente com sequências que promovem a integração no genoma do cloroplasto. Esse vetor geralmente inclui um gene marcador selecionável para identificar células transformadas.
2. entregando o vetor em cloroplastos: Existem dois métodos principais para entregar o vetor em cloroplastos:
* Transformação biolística: Este método usa uma pistola de genes para disparar partículas microscópicas de ouro ou tungstênio revestidas com o vetor de transformação em células vegetais.
* Transformação mediada por agrobacterium: Este método usa a bactéria * Agrobacterium tumefaciens * para entregar o vetor em cloroplastos. * Agrobacterium* naturalmente infecta plantas e integra seu próprio DNA no genoma vegetal. Nesse método, o * Agrobacterium * é projetado para transportar o gene desejado em sua região de T-DNA, que é então transferida para a célula vegetal.
3. Seleção de células transformadas: Após a transformação, as células são selecionadas com base na presença do gene do marcador selecionável. Isso geralmente envolve o cultivo das células em meios que contêm um antibiótico ou herbicida que apenas as células transformadas podem sobreviver.
4. Regeneração de plantas: As células transformadas são então cultivadas em plantas inteiras.
5. Verificação da integração do transgene: A integração do gene desejada no genoma do cloroplasto é confirmada usando técnicas moleculares como PCR ou Southern blotting.

Vantagens da transformação de cloroplasto:

* altos níveis de expressão de transgene: Os cloroplastos têm várias cópias de seu genoma, levando a altos níveis de expressão de transgene.
* estabilidade transgene: O transgene é estável integrado ao genoma do cloroplasto e geralmente é herdado maternalmente.
* sem fuga transgene: O genoma do cloroplasto não é transmitido através do pólen, reduzindo o risco de escapar do transgene para o meio ambiente.

Aplicações da transformação de cloroplasto:

* Produção de produtos farmacêuticos: Produção de proteínas terapêuticas, vacinas e outros farmacêuticos.
* traços de colheita aprimorados: Valor nutricional aprimorado, tolerância ao estresse e resistência a herbicidas.
* biorremediação: Produção de enzimas para biorremediação de poluentes.
* Produção de biocombustíveis: Produção de biocombustíveis a partir de biomassa.

A transformação de cloroplasto é uma ferramenta poderosa para introduzir genes em plantas e tem o potencial de revolucionar a agricultura e a biotecnologia.