Você está fazendo uma ótima pergunta sobre as medições de atividade enzimática! Eis por que usamos espaços em branco e substratos enzimáticos separadamente, em vez de apenas uma solução combinada:

Entendendo os componentes:

* enzima em branco: Isso contém tudo *, exceto * o substrato. Seu objetivo é explicar qualquer atividade ou absorvância em segundo plano que não seja devido à reação enzimática-substrato. Isso pode incluir:
* atividade automática da enzima: Algumas enzimas podem ter uma pequena atividade, mesmo na ausência de seu substrato específico.
* reações não enzimáticas: A própria solução de buffer ou outros componentes na mistura de reação podem contribuir para as alterações de absorvância.
* substrato: Esta é a molécula que a enzima atua para produzir um produto.
* Solução combinada: Isso incluiria a enzima e o substrato.

Por que soluções separadas são cruciais:

1. Medição precisa da reação específica: O uso de espaços em branco e substratos separados permite isolar e medir a atividade apenas devido à interação da enzima com seu substrato específico. Podemos subtrair a atividade de segundo plano medida no espaço em branco da atividade total medida na solução combinada.

2. eliminando a interferência: Misturar a enzima e o substrato de antemão pode levar a:
* Formação prematura do produto: A enzima pode começar a agir no substrato antes do início do experimento, levando a resultados imprecisos.
* degradação da enzima: A enzima pode se tornar instável ou inativa se for pré-misturada com o substrato por um período prolongado.

3. Controle sobre o início da reação: Ao adicionar a enzima e o substrato separadamente, obtemos controle sobre o momento exato em que a reação começa. Isso é essencial para estudar a cinética da reação (quão rápido ela prossegue).

Exemplo:

Imagine medir a atividade de uma enzima que quebra um substrato colorido. Se você combinar a enzima e o substrato, a mudança de cor poderá começar imediatamente, dificultando a determinação da taxa real da reação. Usar um espaço em branco para explicar qualquer cor inicial e medir a mudança de cor especificamente devido à ação da enzima no substrato fornecerá resultados mais precisos.

em resumo:

O uso de espaços em branco e substratos enzimáticos separadamente é crucial para medições de atividade enzimática precisas e confiáveis. Esse método garante que estamos medindo apenas a atividade específica da enzima em seu substrato, eliminando a interferência e permitindo o início da reação controlada.