Usando uma condição gelada durante a lise celular, serve a vários fins cruciais:

1. Minimizando a atividade da enzima:
- Muitas enzimas, especialmente proteases, são sensíveis à temperatura e sua atividade aumenta a temperaturas mais altas. Manter o tampão de lise e o frio da suspensão celular reduz significativamente a atividade enzimática, impedindo a degradação de proteínas e ácidos nucleicos. Isso é particularmente importante para isolar proteínas intactas ou extrair RNA de alta qualidade.

2. Preservando componentes celulares:
- As membranas celulares são compostas de lipídios, que se tornam mais fluidos a temperaturas mais altas. Essa fluidez aumenta o risco de ruptura e vazamento da membrana, levando à perda de componentes celulares como organelas e macromoléculas. As condições frias mantêm a integridade da membrana e impedem a liberação indesejada.

3. Reduzindo a degradação de biomoléculas:
- nucleases (enzimas que degradam os ácidos nucleicas) também são sensíveis à temperatura. As condições frias ajudam a minimizar sua atividade, protegendo o DNA e o RNA da degradação durante a lise.

4. Lentro dos processos celulares:
- Os processos metabólicos nas células continuam mesmo após a lise. Ao manter o frio do lisado, você diminui esses processos, minimizando ainda mais a degradação dos componentes celulares e garantindo uma representação mais precisa do estado celular.

5. Facilitando a agregação de proteínas:
- Em alguns casos, a temperatura fria pode realmente facilitar a agregação de certas proteínas, o que pode ser desejável para aplicações a jusante, como purificação de proteínas ou cristalização.

Considerações específicas:

- A temperatura específica utilizada (por exemplo, 0 ° C ou 4 ° C) dependerá do experimento específico e da sensibilidade das biomoléculas alvo.
- O uso de inibidores de protease no tampão de lise pode minimizar ainda mais a degradação das proteínas, mesmo em temperaturas mais quentes.

Em resumo, o uso de uma condição gelada durante a lise celular é uma etapa crucial para manter a integridade dos componentes celulares, impedir a degradação indesejada de biomoléculas e garantir uma representação mais precisa do estado celular.