A eletroforese em gel é um dos principais métodos utilizados na biologia molecular para a análise do DNA. Este método envolve a migração de fragmentos de DNA através de um gel, onde eles são separados com base no tamanho ou na forma. No entanto, mesmo um método cientificamente sólido, como eletroforese em gel, não está imune a erros.

Como funciona a eletroforese

A eletroforese em gel envolve o uso de um gel normalmente feito de polímeros como a agarose. O gel é imerso em uma solução tampão que conduz um campo elétrico. A amostra de DNA de interesse é primeiro fragmentada usando enzimas de restrição e é então injetada no gel. Quando o campo elétrico é ligado, os fragmentos de DNA no gel migram em direção ao eletrodo positivo. Se os fragmentos de DNA forem de tamanhos diferentes, os tempos de migração serão diferentes para cada fragmento de tamanho. Os fragmentos são então visualizados usando um corante ou autorradiografia e são visíveis como bandas no gel.

Contaminação da Amostra

A principal aplicação da eletroforese é como uma ferramenta para a análise de DNA em biologia molecular, mas também é usado em forense como um meio de identificar amostras de uma cena de crime. É importante que as fontes de erros nesta técnica sejam minimizadas para obter resultados precisos. Uma fonte de erro é a contaminação da amostra de DNA. Se houver DNA estranho na amostra, o gel terá mais bandas do que seria encontrado em um gel que contenha apenas a amostra purificada.

Problemas com o Gel, Corrente e Buffer

A concentração do gel também deve estar correta para evitar erros. Se a concentração for muito alta ou muito baixa, os fragmentos migrarão muito lentamente ou muito rapidamente. Isso levará a erros na resolução das diferentes bandas. Durante a execução da eletroforese, deve-se tomar cuidado para garantir que a tensão esteja estável. Qualquer flutuação na voltagem resultará na migração instável de fragmentos de DNA, levando a erros na leitura das bandas. A solução tampão também deve ter a composição correta, pois um buffer com pH errado ou concentração iônica mudará a forma dos fragmentos de DNA, também mudando seus tempos de migração.

Visualização Apropriada

Mais importante, o gel deve ser visualizado corretamente. Se a concentração do corante ou da sonda radioativa usada para visualizar as amostras for muito alta, a imagem resultante ficará muito confusa, pois os fragmentos residuais também serão visualizados. Se a concentração do gel for muito baixa, não haverá visualização. Quando os processos corretos forem seguidos durante todos os estágios, a eletroforese em gel produzirá resultados precisos e pode ser usada com grande confiança. Como em todos os procedimentos científicos, a eletroforese em gel pode ser propensa a erros, mas estes podem ser minimizados com a preparação e manuseio adequados.