produtos químicos usados na extração de DNA:

1. Buffer de lise:

* função: Quebra células abertas e libera o DNA.
* componentes:
* detergente: Interrompe as membranas celulares (por exemplo, SDS, Triton X-100).
* sal: Ajuda a neutralizar moléculas carregadas e estabiliza o DNA (por exemplo, NaCl).
* buffer Tris: Mantém pH para atividade enzimática ideal.
* EDTA: Agente quelante que se liga a cátions divalentes como magnésio, impedindo a degradação do DNA por DNases.

2. Proteinase K:

* função: Digestas proteínas, incluindo histonas que se ligam ao DNA.
* Mecanismo : Uma serina protease que cliva ligações peptídicas dentro das proteínas.
* Objetivo: Remove proteínas que podem interferir no isolamento e purificação do DNA.

3. Fenol/clorofórmio:

* função: Separa o DNA das proteínas e outros detritos celulares.
* Mecanismo : O fenol desnature as proteínas e as torna insolúveis, enquanto o clorofórmio atua como um desnaturante e ajuda a separar as fases aquosas e orgânicas.
* Procedimento: Após agitação vigorosa, a mistura se separa em três camadas:
* Camada superior:fase aquosa contendo DNA.
* Camada média:interfase contendo proteínas desnaturadas.
* Camada inferior:fase orgânica contendo fenol/clorofórmio.
* O DNA é recuperado da camada aquosa.

4. Etanol/isopropanol:

* função: Precipita o DNA da solução.
* Mecanismo : O DNA é solúvel em água, mas insolúvel em etanol ou isopropanol. Quando adicionados, esses álcoois reduzem a solubilidade do DNA, fazendo com que ele precipite fora da solução.
* Procedimento: Após adicionar etanol ou isopropanol, a mistura é centrifugada para coletar o sedimento de DNA.

5. Te buffer:

* função: Re-suspende e armazena o DNA após a extração.
* componentes:
* buffer Tris: Mantém o pH para a estabilidade ideal do DNA.
* EDTA: Agente quelante que inibe DNases.
* Objetivo: Garante que o DNA permaneça intacto e protegido da degradação durante o armazenamento.

6. RNase A:

* função: Remove a contaminação do RNA.
* Mecanismo : Uma enzima que degrada especificamente o RNA.
* Objetivo: Garante uma amostra de DNA pura para aplicações a jusante, como PCR ou sequenciamento.

Nota: Alguns protocolos podem usar outros produtos químicos, como cloridrato de guanidina ou tiocianato de guanidina para lise, ou colunas de sílica para ligação e purificação do DNA em vez de fenol/clorofórmio.