Os inibidores de protease são enzimas que inibem as ações das proteases, que são certas enzimas que matam as proteínas dentro das células. Existem várias proteases que têm como alvo diferentes proteínas. Portanto, para preservar a funcionalidade das proteínas após a lise celular, é usada uma combinação ou coquetel de inibidores de protease. Estes estão disponíveis em solução, comprimido ou em pó.

Inibidores de Protease

Faça Aprotinina, Leupeptina e Pepstatina em concentrações de estoque de 100µM (MicroMolar).

Aprotinina está disponível em solução em uma concentração de estoque de 100mM. Para perfazer 1 ml (mililitros) de 100µM, dissolver 1 µL (microlitro) em 999 µL do 1X PBS (solução tampão fisiológica).

A leupeptina está disponível sob a forma de pó. O peso molecular da Leupeptina é de 475,6. Dissolva 100ug (microgramas) de pó em 2ml de água para obter uma concentração de 100µM.

Para fazer Pepstatin, dissolver 100µg de pepstatina em pó em 1,45 ml de água para obter uma concentração de 100µM.

Todos estes podem ser misturados ou armazenados individualmente a menos de 80 graus Celsius.

Fazer PMSF (fluoreto de fenilmetilsulfonil) em estoque 100mM. PMSF vem na forma de pó. O peso molecular do PMSF é de 174,19. Dissolva 10mg de PMSF em 572 ul de etanol a 100 por cento e armazene a 4 graus Celsius. Ele é sensível à luz e deve ser armazenado no escuro.

Isso é adicionado ao tampão de lise imediatamente antes do uso.

Misture as proteases juntas nas concentrações necessárias. Geralmente eles são diluídos por um fator de 100 para uso.

Dica

Coquetéis comercialmente disponíveis de inibidores de protease economizar tempo e são fáceis de usar. Eles vêm na forma de comprimidos ou soluções.