Como as enzimas de restrição criam fragmentos de DNA

As enzimas de restrição, também conhecidas como endonucleases de restrição, são tesouras moleculares que cortam o DNA em sequências específicas chamadas locais de reconhecimento. Esse processo é vital para muitas técnicas de biologia molecular, incluindo clonagem de genes, impressão digital de DNA e engenharia genética.

Veja como diferentes enzimas de restrição produzem fragmentos de DNA:

1. Reconhecendo a sequência alvo: Cada enzima de restrição possui um local de reconhecimento específico, uma curta sequência de nucleotídeos de DNA (geralmente 4-8 pares de bases de comprimento). Eles se ligam a essa sequência e cortam a molécula de DNA.

2. Cortando o DNA: Uma vez ligado ao local de reconhecimento, a enzima de restrição cliva as ligações de fosfodiester dentro da espinha dorsal do DNA. Este corte pode ser:

* Blunt-end: A enzima corta diretamente em ambos os fios de DNA, deixando pontas robustas.
* endividado: A enzima corta em uma posição escalonada, deixando saliências em cada fio. Essas saliências são complementares e são chamadas de pontas pegajosas porque podem facilmente anunciar (se unirem) através da ligação de hidrogênio.

3. Produzindo fragmentos de DNA: O corte pela enzima de restrição resulta em dois fragmentos de DNA com extremidades específicas. O tamanho e a sequência desses fragmentos dependem da enzima usada e da localização de seu local de reconhecimento na molécula de DNA.

Aqui estão alguns exemplos de como diferentes enzimas de restrição produzem fragmentos diferentes:

* ecori: Essa enzima reconhece a sequência GAATTC e corta entre o G e A, deixando pontas pegajosas com uma saliência de 5 '.
* hindiii: Esta enzima reconhece a sequência AAGCTT e corta entre o A e A, deixando pontas pegajosas com uma saliência de 5 '.
* smai: Essa enzima reconhece a sequência CCCGGG e corta diretamente em ambos os fios, deixando as pontas bruscas.

Significado de diferentes estilos de corte:

* Ends pegajosos: Permita que fragmentos de diferentes moléculas de DNA sejam cortados com a mesma enzima que sejam ligados juntos. Esse processo é essencial para a clonagem de DNA.
* termina robusta: Também pode ser ligado, mas é menos eficiente do que as pontas pegajosas. Isso ocorre porque não há saliência complementar para orientar a reação de ligação.

Conclusão:

Diferentes enzimas de restrição criam fragmentos exclusivos de DNA, reconhecendo sequências específicas e cortando a molécula de DNA de maneiras diferentes. Esta propriedade permite a manipulação precisa do DNA para várias aplicações em biologia molecular e biotecnologia.