Os biólogos usam vários métodos para extrair DNA das células, e o método específico depende da fonte do DNA (por exemplo, sangue, tecido, bactérias) e o uso pretendido do DNA extraído. Aqui está uma visão geral simplificada:

1. Lise celular:

* Abrir as células: Este é o primeiro passo, onde a membrana celular e a membrana nuclear são interrompidas para liberar o DNA.
* Métodos mecânicos: Isso inclui o uso de um liquidificador (para amostras maiores), sonicação (usando ondas sonoras) ou moer as células (para tecidos).
* Métodos químicos: Usando detergentes (como SDS) ou enzimas (como a lisozima) para quebrar as membranas celulares.

2. Isolamento de DNA:

* separando o DNA de outros componentes celulares: Após a lise, a mistura contém DNA, proteínas, lipídios e outros detritos celulares.
* Digestão enzimática: Enzimas como a proteinase K são usadas para quebrar as proteínas, separando ainda mais o DNA de outros componentes celulares.
* precipitação de sal: A adição de soluções de sal como o cloreto de sódio pode fazer com que o DNA precipite da solução, enquanto outros componentes celulares permanecem dissolvidos.
* Extração orgânica: Usando solventes orgânicos como fenol-clorofórmio para separar o DNA das proteínas e outros componentes celulares. O DNA permanece na fase aquosa, enquanto os outros componentes são extraídos na fase orgânica.

3. Purificação do DNA:

* Removendo contaminantes: Após o isolamento, o DNA ainda pode conter impurezas como RNA ou proteínas.
* precipitação de etanol: A adição de etanol à solução faz com que o DNA precipite, permitindo uma purificação adicional.
* Cromatografia em coluna : Usando colunas especializadas com resinas específicas que se ligam ao DNA, permitindo a remoção seletiva de contaminantes.

4. Armazenamento de DNA:

* armazenando o DNA purificado: O DNA isolado pode ser armazenado em buffers a temperaturas específicas para uso a longo prazo.

Considerações adicionais:

* tipo de célula: O método utilizado dependerá do tipo de célula estudada, por exemplo, células bacterianas são mais fáceis de lidenciar do que as células de mamíferos.
* Quantidade de DNA necessária: A quantidade de DNA necessária afetará o método escolhido.
* Aplicações a jusante: O uso pretendido do DNA (por exemplo, sequenciamento, PCR, clonagem) pode exigir etapas de purificação específicas.

Exemplo:

Um método comum para extrair o DNA do sangue envolve:

1. lysis: O sangue é misturado com um tampão de lise contendo detergentes e enzimas para abrir as células e liberar o DNA.
2. Remoção de proteínas : A proteinase K é adicionada para digerir proteínas e separar ainda mais o DNA.
3. centrifugação: A mistura é girada em uma centrífuga para separar o DNA de outros componentes celulares.
4. precipitação de etanol: O etanol é adicionado para precipitar o DNA, que é então coletado por centrifugação.
5. Lavagem e armazenamento: O sedimento de DNA é lavado para remover os contaminantes restantes e armazenado em uma solução tampão.

Essa visão geral simplificada destaca as principais etapas envolvidas na extração de DNA. Existem variações e otimizações desses métodos, dependendo dos requisitos experimentais específicos.