A principal razão pela qual você mancha um espécime antes de colocá-lo sob o microscópio é dar uma boa olhada nele, mas a coloração faz muito mais do que simplesmente destacar os contornos das células. Algumas manchas podem penetrar nas paredes das células e destacar os componentes celulares, e isso pode ajudar os cientistas a visualizar os processos metabólicos. As manchas também ajudam a distinguir entre células vivas e mortas. Além disso, a coloração permite aos cientistas contar o número de células de um determinado tipo dentro de uma determinada biomassa. Vinte ou mais tipos diferentes de manchas existem, e cada um tem sua finalidade.
TL; DR (muito longo; não leu)
O principal objetivo da coloração é realçar as células e partes de células. Mais de 20 tipos diferentes de manchas existem, e o tipo de mancha que você usa depende do que você está procurando.
Tipos de Manchas
A escolha da mancha depende do que você está procurando. Nem todas as manchas são adequadas para células vivas, mas aquelas que incluem o marrom Bismarck, o vermelho tolueno, o azul do Nilo e o vermelho do Nilo, e certas fluorescentes usadas para destacar o DNA. Algumas manchas destacam esporos, algumas detectam lipídios e proteínas, e algumas mudam de cor na presença de amidos. O objetivo do exame determina o melhor tipo de mancha a ser usado. Por exemplo, um médico que conduz um esfregaço de PAP usaria Eosina Y. É um corante fluorescente ácido que fica vermelho quando entra em contato com glóbulos vermelhos, citoplasma e membranas celulares. Também é usado para testar a medula sanguínea.
Em alguns casos, um investigador pode usar mais de uma mancha. Por exemplo, a hematoxilina é uma mancha que transforma o núcleo das células em azul. Quando usado em conjunto com a eosina, que transforma as outras partes da célula em vermelho ou rosa, proporciona um contraste mais forte e facilita a diferenciação dos núcleos. Esfregaços de PAP e amostras de sangue são mais fáceis de examinar quando essas duas manchas são usadas juntas.
Gram's Stain: trabalhadores de hospitais usam a coloração de Gram para identificar bactérias nocivas. Esta é, na verdade, uma série de corantes que têm diferentes efeitos em diferentes tipos de bactérias e dão aos médicos uma importante ferramenta de diagnóstico. A mancha de Gram é um processo de três partes. No primeiro, é adicionada a violeta de cristal de Hucker, que mancha todas as bactérias de uma cor violeta uniforme. No estágio seguinte, adiciona-se coloração de iodo, que faz com que a cor adira às células Gram-positivas, que são principalmente Staphylococcus e Streptococcus. A mancha é lavada, deixando as células Gram-positivas com uma cor violeta distinta; em seguida, uma terceira mancha, Safranine O, é introduzida para melhorar o contraste entre as bactérias Gram-negativas e o restante do material na lâmina.
Procedimento de coloração
Ao preparar uma amostra em um slide, você pode montar a seco ou molhado-lo, você pode cortá-lo em uma seção fina ou você pode manchá-lo. Ao usar uma mancha, o procedimento usual é colocar a amostra em umedecimento, o que significa colocar uma gota de água na lâmina, colocar a amostra na água e cobrir com uma lamínula. Você então aplica a mancha a um canto do slide com um conta-gotas e permite que ele seja atraído para a amostra por ação capilar. Isso ajuda a colocar uma toalha de papel no lado oposto do slide para atrair a água. Quando a mancha se espalhar por todo o slide, a amostra estará pronta para ser examinada.
