A eletroforese em gel é um método usado em laboratórios para medir e classificar filamentos de DNA. É necessário porque o DNA em condições normais é pequeno demais para manipular, mesmo quando visto usando a maioria dos microscópios. Eletroforese em gel é um procedimento relativamente simples, e a mesma técnica básica também pode ser usada para separar proteínas individuais.

A matriz de gel

Para começar a eletroforese em gel, você deve primeiro criar o gel . Normalmente, os géis são feitos em folhas finas usando uma substância chamada agarose. Agarose em pó é colocada em um frasco, seguido por uma solução de água salgada chamada buffer. Esta mistura de agarose e tampão é aquecida até as duas substâncias se fundirem, depois vertidas num molde de formação. Um dispositivo chamado pente é então colocado em uma extremidade do molde antes do gel esfriar. Quando o gel é resfriado, o pente é removido, deixando pequenas fendas que serão usadas para conter amostras de DNA.

Uma característica especial da mistura de agarose resfriada (chamada matriz de gel) deriva do fato de que é criado com água salgada. Quando eletrificada, a matriz se tornará condutiva, permitindo que a eletricidade flua ao longo de seu comprimento. Outra propriedade especial da matriz de gel é a presença de orifícios microscópicos regulares. Esses buracos permitirão que filamentos de DNA percorram a matriz de gel e facilitarão o processo de classificação.

A Câmara de Eletroforese

Seu próximo passo é criar uma câmara de eletroforese. Esta é uma pequena caixa retangular, conectada com uma conexão elétrica positiva e negativa em cada extremidade. As câmaras são geralmente rasas, pequenas o suficiente para caber em uma mesa, e construídas a partir de materiais claros como Plexiglas.

A solução de água salgada é despejada no fundo da câmara de eletroforese e a matriz de gel é submergida levemente dentro desta solução . A água salgada serve a dois propósitos: auxiliar o fluxo de eletricidade e manter a matriz de gel úmida. Como o DNA é impulsionado por uma carga negativa, coloque sua matriz para que suas amostras sejam localizadas ao lado de sua conexão elétrica negativa.

Preparando o DNA

As amostras de DNA são então preparadas. Como o DNA em solução é praticamente impossível de ser visto, um agente de coloração chamado buffer de carga é adicionado a cada amostra individual. Este agente também engrossa a solução de DNA, tornando-a menos escorregadia e mais viável. Usando uma pipeta, transfira uma amostra de solução de DNA para cada slot alternado na matriz de gel. Na fenda vazia entre cada amostra, coloque uma solução de DNA cujo comprimento você já conhece (chamado padrão de DNA) para controle e comparação com experimentos.

Ligue o Poder -

Agora, ligue o seu câmara de eletroforese. Sob o poder negativo, suas amostras de DNA serão forçadas através do comprimento da câmara. Pequenos filamentos de DNA se moverão mais rapidamente através da matriz de gel e, em um curto espaço de tempo, eles se separarão de filamentos mais longos e lentos. O corante no agente de coloração permite seguir o rastro do DNA. Você não será capaz de ver filamentos individuais de DNA, mas filamentos de mesmo comprimento se agruparão.

Etapas Finais

Quando o DNA é separado, a matriz é removida da eletroforese câmara. O DNA é então corado para facilitar a medição e o exame.