Um espectrofotômetro é usado para determinar a concentração de certos compostos, como proteínas, em uma solução. Em geral, uma luz brilha através de uma cuvete preenchida com uma amostra. A quantidade de luz absorvida pela amostra é medida. Como os compostos absorvem luz em diferentes faixas espectrais, o comprimento de onda correto deve ser definido para a análise. Existem várias maneiras de calcular a concentração de amostras desconhecidas por espectrofotometria, no entanto, o uso de padrões de referência oferece a melhor precisão. Além disso, os padrões também indicam se o espectrofotômetro está com defeito ou outros problemas com a análise.

Calculando através de equações de linha reta

Analise os padrões de referência no início da análise. Os padrões são concentrações conhecidas e são usados ​​para calibrar equipamentos e verificar a precisão. Todas as amostras devem estar dentro da faixa de trabalho dos padrões. Caso contrário, as amostras precisarão ser diluídas ou a concentração de padrões aumentada.

Faça um gráfico de dispersão ou um gráfico de linha com leituras padrão de concentração e absorção. A concentração será no eixo y, a absorvência no eixo x. Por exemplo, os padrões são 1 ppm, 2,5 ppm e 5 ppm. A absorvência dada foi de 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 e 5 ppm = 0,75.

Formate a linha de tendência para exibir uma equação no gráfico. A equação mostrará a fórmula y = mx + b. Por exemplo, usando os padrões na etapa 2, a equação é y = .1224x + 0.1531. A maioria das linhas de tendência é interceptada em zero, mas depende do método analítico e do valor de R ao quadrado.

Analise amostras desconhecidas e registre leituras de absorbância.

Use a equação (y = mx + b ) para determinar a concentração das amostras.

Entendendo a Equação da Linha Reta -

Deixe "Y" igual à concentração. Isto é o que será resolvido para.

Deixe "X" igual a absorvência da amostra. Esta é a absorvência medida pelo espectrofotômetro.

Permite que “” seja igual à inclinação e “b” seja igual à interceptação y. Ambos são dados, no entanto, se a linha de tendência for forçada a 0, então "b" será 0.

Resolva a concentração. Usando o exemplo na etapa 3, substitua "x" como uma absorvência determinada de 0563. Portanto:

y = .1224 (.563) + 0.1531

y (concentração) = .222011

Dica

As unidades da concentração ser o mesmo que os padrões. Por exemplo, unidades são partes por milhão (ppm) ou partes por bilhão (ppb).

Padrões de referência e amostras são facilmente contaminadas.

Aviso

Sempre leia todas as partes de ensaio ou método antes de se desenvolver.