Pesquisadores desenvolvem plataforma de molécula única eficiente e acessível para detecção de várias espécies de amilina
Esquema da plataforma de molécula única e das características estruturais das espécies de amilina dependentes de pH com base em caracterizações SERS e simulações MD. Crédito:HKUST Uma equipe de pesquisa liderada pela Universidade de Ciência e Tecnologia de Hong Kong (HKUST) desenvolveu uma plataforma de Espectroscopia Raman de Superfície Aprimorada (SERS) controlada por pinça plasmônica óptica que utiliza controle ligado e desligado da luz para sondar várias espécies de amilina em misturas no nível de molécula única, revelando as estruturas heterogêneas das espécies de amilina dependentes do pH e os segredos por trás dos mecanismos de agregação amilóide associados ao diabetes tipo 2.
Ao remover a média do conjunto, as técnicas de molécula única discernem o sinal de moléculas individuais para revelar detalhes ocultos e revolucionar nossa compreensão de sistemas moleculares complexos e heterogêneos. As abordagens atuais de molécula única estão limitadas à ultradiluição e/ou imobilização molecular porque o volume de detecção limitado por difração não pode ser reduzido ainda mais.
Considerando que certas biomoléculas envolvem-se em várias interações que são significativamente afetadas pelas concentrações. Por exemplo, como uma proteína intrinsecamente desordenada típica, o polipeptídeo amilóide de ilhotas humanas (amilina, hIAPP) não possui estruturas secundárias estáveis, mas possui propensão de agregação governada por fatores ambientais, como concentração e pH, para formar diferentes intermediários oligoméricos e fibrilas amilóides no diabetes tipo II. pacientes.
O mecanismo molecular permanece obscuro, devido aos desafios de detecção de espécies de amilina raras, transitórias e heterogêneas em uma mistura dinâmica, exigindo o desenvolvimento de métodos avançados de molécula única.
Em um avanço recente, a equipe de pesquisa liderada pelo Prof. Huang Jinqing, professor assistente do Departamento de Química da HKUST desenvolveu com sucesso uma nova plataforma de molécula única combinando manipulação plasmônica óptica e medição SERS para reduzir o volume de detecção e elevar o aprimoramento do sinal, permitindo eficiência e caracterização de molécula única de alto rendimento para estudar espécies de amilina dependentes de pH em concentrações fisiológicas.
Especificamente, a equipe construiu uma junção plasmônica entre duas microesferas de sílica revestidas com nanopartículas Ag para capturar uma nanopartícula Ag adicional para formar uma nanocavidade dinâmica após irradiação a laser, que poderia encapsular uma única ou algumas moléculas para caracterizações SERS sensíveis.
Uma vez que tanto o aprisionamento plasmônico óptico quanto os fenômenos SERS estão espacialmente confinados na escala nanométrica, ele ultrapassa o limite de difração óptica para permitir o controle preciso da posição, minimizar o volume de detecção e aumentar o aprimoramento do SERS simultaneamente.
Além disso, os dímeros de microesferas de sílica revestidos com nanopartículas Ag construídos são mais estáveis do que as nanopartículas Ag convencionais montadas em soluções, tornando mais fácil observar e localizar a junção plasmônica em microscópios regulares para melhorar a eficiência e a reprodutibilidade. Ao alternar a luz do laser entre os estados “ligado” e “desligado”, os pesquisadores podem controlar o aprisionamento plasmônico óptico para modular a montagem e desmontagem da nanocavidade dinâmica para amostragem de alto rendimento e medições simultâneas de SERS.
Usando esta plataforma eficiente de molécula única, a equipe de pesquisa aproveitou uma quantidade estatisticamente significativa de espectros SERS subjacentes às características estruturais de várias espécies de amilina sob duas condições fisiológicas distintas:os grânulos secretores das células β pancreáticas em pH 5,5 e os compartimentos extracelulares em pH 7,4, respectivamente.
Dois tipos de espécies de amilina de baixa densidade populacional foram identificados a partir de seus monômeros predominantes no estágio inicial da agregação amilóide em pH neutro, contendo uma estrutura de curva crítica ou um gancho β curto com terminal C restrito, conforme suportado por simulações de dinâmica molecular (MD). .
Uma mudança tão ligeira no equilíbrio entre as diferentes espécies de amilina poderia conduzir ao desenvolvimento irreversível de amilóide mesmo após o pós-ajuste do pH de 7,4 para 5,5. Assim, a caracterização estrutural direta destas espécies de amilina dentro de misturas heterogêneas indica o impacto do pH nas suas interações intra e intermoleculares e esclarece o mecanismo por trás da agregação amilóide regulada pelo pH para a compreensão do diabetes tipo 2.
“Apresentamos uma estratégia fácil de usar que reduz o volume de detecção, melhora o sinal molecular e aumenta a eficiência da rotatividade”, explicou o Prof. "Nossa plataforma de molécula única pode adquirir uma grande quantidade de espectros SERS como instantâneos moleculares, comparáveis àqueles obtidos através de simulações MD. Ao analisar estatisticamente os detalhes estruturais no nível da molécula única, somos capazes de reconstruir as propriedades em massa e obter resultados únicos insights sobre a população e a probabilidade de tipos específicos de moléculas dentro da mistura heterogênea. Tem o potencial de descobrir mistérios ocultos em sistemas complexos.
O estudo foi publicado recentemente na Nature Communications .
Mais informações: Wenhao Fu et al, Caracterização SERS de molécula única controlada por pinça plasmônica óptica eficiente de espécies de amilina dependentes de pH em meios aquosos, Nature Communications (2023). DOI:10.1038/s41467-023-42812-3 Informações do diário: Comunicações da Natureza
Fornecido pela Universidade de Ciência e Tecnologia de Hong Kong